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用T7噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

实验材料 大肠杆菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3)pET 载体或同类载体阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液IPTGSDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段NZCYM 琼脂平板NZCYM 培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或相当的转头沸水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的成分参见附录1。贮存液稀释至适当浓度。考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液参见附录8。IPTG(1mol/L)1XSDS凝胶加样缓冲液不含DTT的1xSDS加样缓冲液室温保存，1mol/LDTT贮存液现用现加于上述缓冲液。凝胶SDS-聚丙烯酰胺凝胶（10%)用于分离蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备参考附录8。核酸和寡核苷酸靶基因或cDNA片段培养基含氨苄（50ug/ml）的 NZCYM 琼脂平板含氮苄（50ug/ml) 的 NZCYM 培养基离心机和转头SorvallGSA 转......阅读全文