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胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定实验

试剂、试剂盒 牛血淸白蛋白猪胰岛素[125I]胰岛素(受体级)结合缓冲液实验步骤 材料[125I]胰岛素(受体级)(DuPontNENNEX196)猪胰岛素(如,Sigma Chemical Co,I3505)牛血淸白蛋白(BSA;1%)试剂结合缓冲液(冷配体置换实验用)(配方,见“试剂的配制”,PP.234~240)操作程序1)于微量离心管中建立下列反应体系:2)各离心管置摇床上,室温下孵育2h。3)各管用微型离心机离心20min,去上清。4)用γ-计数器计数离心管内的放射性强度。分别从第1至6管的cpm值中减去第7管的cpm值(非特异性cpm值和本底cpm值),得特异结合的cpm值。5)将各管的特异性结合cpm值除以总cpm值,得与膜结合的那部分胰岛素所占的份额。该值乘以各管中的胰岛素浓度,即得配体-受体复合物的浓度([HR],亦称[B],它表示结合的配体)。6)从管中的胰岛素浓度减去[HR],得游离配体的浓度([H],亦称......阅读全文

胰岛素受体的溶解及活性测定实验

胰岛素受体的溶解及活性测定实验             试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜

胰岛素受体的溶解及活性测定实验

试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白 [125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B 溶液 C 结合缓冲液仪器、耗材 Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤 材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125

胰岛素受体的溶解及活性测定实验

试剂、试剂盒纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白[125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B溶液 C结合缓冲液仪器、耗材Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125I] 胰岛素

胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定实验

本实验介绍胰岛素受体对胰岛素亲和性的测定方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒牛血淸白蛋白猪胰岛素[125I]胰岛素(受体级)结合缓冲液实验步骤材料[125I]胰岛素(受体级)(DuPontNENNEX196)猪胰岛素(如,Sigma Chemical Co,I350

胰岛素亲和层析实验

胰岛素亲和层析实验             试剂、试剂盒 部分纯化的胰岛素受体

胰岛素亲和层析实验

试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体,得自 WGA-琼脂糖柱层析(见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖(~2 ml 预装胶)(SigmaC

膜上胰岛素受体数量的测定实验

膜上胰岛素受体数量的测定实验             试剂、试剂盒 结合缓冲液

多肽物质分离与分析方法研究(二)

1.2 亲和层析(Affinity Chromatography,AC)  AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲合性而分离物质的层析方法。自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来,在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合,如抗原-抗体、酶-催化底物

蛋白质、多肽提取分离

1 分离方法   采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是蛋白

多肽物质分离与分析方法研究进展

  摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法,主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。  多肽类化合物广泛存在于自然界中,其中对具有一定生物活性的多肽的研究,一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体