流感病毒RNA提取
试剂、试剂盒 10×RSB 溶液 10%SDS 蛋白酶 K lOXLiCI 溶液 RSB 饱和的酚 氯仿 异戊醇 2mol L 乙酸钠 无水乙醇 TSE 溶液 LiCl 缓冲液平衡酚 TSE 饱和酚 4mol LLiCL实验步骤 一 材料与设备1. 酚提法1)10×RSB 溶液:O.Olmol/LTris,O.OOlmol/LKCl,0.0015mol/LMgCL22)10%SDS3) 蛋白酶 K,5 mg/ml4)lOXLiCI 溶液:5%SDS,0.lmol/L 乙酸钠,1.4mol/LLiCl。5)RSB 饱和的酚.6) 氯仿:异戊醇 (24:1)7)2mol/L 乙酸钠。8) 无水乙醇。2.LiCl 提取法1)TSE 溶液。2)10%SDS,3) 蛋白酶 K(10 mg/ml)。4)lOXLiCl 溶液:5%SDS,0.lmol/L 乙酸钠,1.4mol/LLiCl5)LiCl 缓冲液平衡酚6) 氯仿7)2mol/L 乙......阅读全文
流感病毒-RNA-提取
试剂、试剂盒 10×RSB 溶液 10%SDS 蛋白酶 K lOXLiCI 溶液 RSB 饱和的酚 氯仿 异戊醇 2mol L 乙酸钠 无水乙醇 TSE 溶液 LiCl 缓冲液平衡酚 TSE 饱和酚 4mol LLiCL实验步骤 一 材料与设备1. 酚提法1)10×RSB 溶液:O.Olmol/LT
流感病毒-RNA-提取
试剂、试剂盒 10×RSB 溶液 10%SDS 蛋白酶 K lOXLiCI 溶液 RSB 饱和的酚 氯仿
2.8.1-流感病毒-RNA-提取
试剂、试剂盒10×RSB 溶液10%SDS蛋白酶 KlOXLiCI 溶液RSB 饱和的酚氯仿异戊醇2mol L 乙酸钠 无水乙醇TSE 溶液LiCl 缓冲液平衡酚TSE 饱和酚4mol LLiCL实验步骤一 材料与设备1. 酚提法1)10×RSB 溶液:O.Olmol/LTris,O.OOlmol/
禽流感病毒RNA提取protocol
1,用异硫氰酸胍提取1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul -20度预冷的异丙
禽流感病毒RNA的三种提取方法
实验概要本实验介绍了禽流感病毒RNA的三种提取方法:异硫氰酸胍提取,TRIzol LS提取及Trizol法。实验步骤1. 用异硫氰酸胍提取 1) 取200ul样品数 阴性对照 阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管。 2) 加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后
RNA提取
RNA提取(主要内容如下)Tips for Handing RNA Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum Basic Procedures for Handing
总RNA提取(Trizol提取)
在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase 的作用。1. 提取组织RNA 时,每50~100mg 组织用1ml
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成
RNA的提取
【实验原理】Trizol 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA 的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA 可以通过异丙醇沉淀获得。【实验仪器】1. 匀浆机2. 低温离心机3. 涡旋器【试剂及配制】1
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成
RNA的提取
一、准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)。二、操作步骤:1. 匀浆处理:a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞
RNA提取时RNA降解原因
1 ) 新鲜细胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鲜组织: 某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。 3 ) 冷冻样品: 样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存
核酸提取——RNA提取与DNA的提取
核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量极大,从数万到亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中 的溶解度有显著区别,在一定浓
核酸提取——RNA提取与DNA的提取
核酸分为两大类:一类为核糖核酸(RNA),另一类为脱氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量极大,从数万到亿万。核酸是两性化合物,在一定的等电点溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有机溶剂。细胞内的核酸常和蛋白质结合成核蛋白。核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白在不同浓度的电解质溶液中 的溶解度有显著区别,在一定浓
植物病毒RNA提取
大多植物病毒RNA为单链RNA,并且其极性与mRNA极性相同,植物病毒RNA提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液(10mg/ml)。 二、设备 冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以:(1)用于RNA病毒复制机制研究;(2)用于反向遗传学研究;(3)用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒,可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂,异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇,加上整个操作都在冰浴下进行,这样就能显著降低RNA 的
TRIzol-RNA提取方法
(一)试剂准备1.TRIzol试剂。2.氯仿3.异丙醇4.75%乙醇(DEPC H2O配制)5.DEPC H2O(二)操作步骤1. 样品处理:(1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。(2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-
TRIzol-RNA提取方法
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。TRIzol RNA提取方法:(1)操作简单的,提取方便,回收率高; (2)提取的RNA的质量高,对cDNA库,RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。实验方法原理Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采
动物RNA提取实验
SV总RNA试剂盒提取法 Trizol试剂提取法 实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA
提取病毒RNA方法
一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤,可参考(我提过N次做定量PCR都没问题):1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时,
总RNA的提取
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有效地将RN
提取植物rna方法
提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。 众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因
RNA提取技术概述
RT-PCR是将RNA的反转录(Reverse Transcription,RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术,近年来得到快速发展和广泛应用。首先,经反转录酶的作用,以RNA为模板,合成互补的DNA链(cDNA),再以cDNA为模板,通过PCR扩增合成目的片段。RT-PC
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA,方法简单、快速。该系统以膜为基础,根据组织类型的不同,每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤,直接在小离
全血RNA提取
摘要: RNA提取应该说已经成为了一种常见的分子生物学操作步骤了,但是不少科研人员仍然烦恼着如何寻找一种最好的方法,或者找到一种适合于特殊用途方法。比如说传统的血液标本表达谱芯片实验需要先把有核细胞从全血中分离出来,加白细胞分离液、离心等步骤,比较繁琐,如果能进行全血的提取,那就再好不过。RNA提取
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
TRIzol-RNA提取方法
实验方法原理 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构