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电镜酶细胞化学实验

实验方法原理 电镜酶细胞化学反应分两步:①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应(形成初级产物);②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子致密物质。电镜酶细胞化学捕捉方法很多,最常用于水解酶类的为金属盐沉淀法和应用于氧化还原酶类的为嗜锇物质形成法。金属盐沉淀法原理是酶反应初级产物与重金属结合形成不溶解的电子致密物,常用铅、铈等。嗜锇物质形成法原理是氧化酶类和二氨基联苯胺(DAB)反应形成嗜锇中间产物,然后与锇形成高电子密度的锇黑沉淀。实验步骤 1. 取材组织取材 10 mm × 5 mm × 5 mm 左右大小,固定后用振荡切片机切成 40~100 μm 厚片,也可用剃须刀片手工切厚片。取白细胞和骨髄时采用细胞分离液分离外周血。取培养细胞时用橡皮刮。游离细胞经离心(800 r/min)5 min,凝块后用剃须刀片切成厚片,漂洗备用。2. 固定固定方式与免疫电镜基本相同,分为血管灌注固定(10~15 min)、浸泡固定(1......阅读全文

免疫细胞化学常用试剂介绍

一、固定剂  大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽

免疫细胞化学常用试剂介绍

一、固定剂  大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽

人晶状体上皮细胞在体外基质中的生长与分化

实验概要本文描述了体外生长的人晶状体上皮细胞的生长情况与非永生化人晶状体上皮细胞的成熟过程。从18周大的胎儿晶状体上获得的人晶状体上皮细胞,在培养基中维持在牛角膜内皮(BCE)的细胞外基质(ECM)上,辅以纤维母细胞生长因子(FGF-2)。从培养过程中的特点、生长以及分化以染色体组型、细胞形态、和生

组织标本的处理

 取 材 取材是制作切片程序中的首要步骤,取材不当,将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要,不能随意的切取组织来制作组织切片,否则病理检验的结果是不会令人满意的。一、取材工具:取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦,不应使用有钩镊子或血管钳等手术