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植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验(二)

2. 在平板仪器上进行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)满足下列条件时,水化后的 IPG 胶条可以直接放在 IEF 仪器的冷却板上:① 如果运行时间不超过 12 h ( 经常发生在宽的或中等 pH 范 围 IPG,如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯度不超 过 pH 10. 0。③ 如果只用杯上样的方法加很小体积的样品 ( 20 μl ) [ 3,22 ]。使用 Immobiline 干胶条试剂盒中的上样杯更方便进行大体积的样品上样( 直至 100 μl )。当用干胶条试剂盒进行 IEF 时,IPG 胶条可以用硅树脂油或干胶条覆盖油覆盖。当样品为极端碱性(pH > 10.0 ) 蛋白质或用窄 pH 梯度( pH 范围< 1 单位)进行微量制备电泳时必须用覆盖油等覆盖;而当 pH 范围较宽且 pH 梯度不超过 pH 10.0 ( 如 IPG ......阅读全文

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验(二)

2. 在平板仪器上进行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit) 满足下列条件时,水化后的 IPG 胶条可以直接放在 IEF 仪器的冷却板上:① 如果运行时间不超过 12 h ( 经常发生在宽的或中等 pH 范 围 IPG,如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 p

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验

试剂、试剂盒尿素裂解溶液IPG 干胶条水化液IPG 胶条平衡液SDS 凝胶缓冲液电极缓冲液储液丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺溶液过硫酸铵溶液琼脂糖溶液仪器、耗材等电聚焦仪IPGphor多重垂直 SDS 电泳仪实验步骤3.1 第一向:在 IPG 胶条中进行等电聚焦( IPG-IEF)采用 IPG ( IPG

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验

试剂、试剂盒 尿素裂解溶液                                                                  IPG 干胶条水化液                                                

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验(一)

试剂、试剂盒 尿素裂解溶液IPG 干胶条水化液IPG 胶条平衡液SDS 凝胶缓冲液电极缓冲液储液丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺溶液过硫酸铵溶液琼脂糖溶液 仪器、耗材 等电聚焦仪 IPGphor多重垂直 SDS 电泳仪 实验步骤 3.1 第一向:在 IPG 胶条中进行等电聚焦( IPG-IEF)

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验(三)

使用 IPGphor 进行 IEF 的典型工作条件见表13-2和 表 13-3 。正如前文指出的那样 ,为了使高分子质量的蛋白质更好地进入聚丙烯酰胺胶内,水化时应在胶条两端加低电压(30~50 V ) ,否则将给水化上样造成困难[ 15,28] 。然后电压逐步升高至 8000 V。如果 I

植物蛋白质组学中的双向电泳技术实验(四)

3.3 第二向:多重垂直 SDS-PAGE SDS-PAGE 可以在水平或垂直系统上进行 [29] 。水平设备适用于预制胶(ExcelGel SDS;Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系统则应用于多块胶平行进行的电泳中,尤其是大规模的蛋白质

植物蛋白质组学和糖基化实验(二)

刀豆球蛋白 A (ConA)- 过氧化物酶方法(根据参考文献 20 修改的方法)。 ( 1 ) 通过 1D 或 2D 电泳分离,并转移到硝酸纤维素膜上。 ( 2 ) 用 TTBS 缓冲液浸泡印迹膜 1 h。 ( 3 ) 将印迹膜在含有 ConA ( 25 μg/ml)的 TTBS 缓冲液中,

蛋白质组学研究中的核心技术—双向凝胶电泳

人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布,他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱,至此,人类基因组计划已基本完成,随着后基因组时代的到来,蛋白质组学得到了空前的发展,蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律

蛋白质组学研究中的核心技术—双向凝胶电泳

人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布,他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱,至此,人类基因组计划已基本完成,随着后基因组时代的到来,蛋白质组学得到了空前的发展,蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质

蛋白质组学研究中的核心技术—双向凝胶电泳

许华林 张曼 人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布,他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱,至此,人类基因组计划已基本完成,随着后基因组时代的到来,蛋白质组学得到了空前的发展,蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执