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实验常见问题解答汇集(一) BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？ 由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，无法确定甲基化的程度，必需通过回收PCR产物，进行TA克隆，随机挑选5-10个单克隆测序的方式才能计算获得每个CG位点的甲基化情况。 如何提高哺乳动物细胞的转染效率？ 对于生物技术科研实验，拟将外源基因（或DNA序列）导入到体外培养的细胞中（尤其是各类哺乳动物细胞），让外源基因在细胞中进行表达甚至翻译，到达预期目的，那么除了保障携带基因的质粒载体上具备高表达元件（启动子、增强子、终止子等）之外，另外一个重要因素是让外源基因的转染效率达到极高值，尤其对于基因干扰研究实验而言，达到80%以上的转染效率，是干扰评价实验顺利完成的......阅读全文
实验常见问题解答汇集(一) BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？ 由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，
BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，无法确定甲基化的程度，必需通过回收PCR产物，进
Q&A 常见问题： 如何选择合适的一抗？ 如何选择合适的二抗？ 如何选择合适的同型对照？ 如何选择阳性对照？ 如何确定一抗的稀释比例？ 如何选择合适的抗原修复方式？ 为何WB检测条带大小与预期有差别？ 抗体能够用于其他种属/实验
常见问题： 如何选择合适的一抗？ 如何选择合适的二抗？ 如何选择合适的同型对照？ 如何选择阳性对照？ 如何确定一抗的稀释比例？ 如何选择合适的抗原修复方式？ 为何WB检测条带大小与预期有差别？ 抗体能够用于其他种属/实验方法？
1.原代细胞与细胞系有什么区别？ 细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义，第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells.
通常来讲，real-time qPCR 的反应程序不需要像常规的 PCR 那样，要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80～150 bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。 SYBR@Green 等染料法，最好在 PCR 扩增程序结束后，加一个溶解程序，来形成溶解曲线，判断 PC
1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对D
1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？ 答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞
1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对D
PC-ADP（脉冲相干声学多普勒剖面仪）代表了多普勒剖面技术的技术发展水平。因为它在固件和硬件上与传统ADP都有所不同，因此，对于这种产品，用户常有很多疑问。脉冲相干模式到底是什么？在脉冲相干模式下，ADP发送一对脉冲，两脉冲间通过一个时间的延迟将之分开。然后测量每个脉冲返回信号的相位。被时间分开的