realtimePCR体系的优化
实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的朋友有所帮助。1、基本参数的优化：1）MgCl2的浓度：在PCR反应中，MgCl2的浓度对酶的活性是至关重要的，不仅如此，合适的MgCl2的浓度还能在反应中得到较低的 Cp(crossingpoint)值（指PCR达到指数扩增期时，产生一定的荧光高于背景并为仪器所识别时的循环数），较高的荧光信号强度以及良好的曲线峰值。所以对其的浓度选择应慎重。一般来说，对以DNA或cDNA为模板的PCR反应，应选择2－5mM浓度的MgCl2，对以mRNA为模板的 RT－PCR而言，则应选择的浓度为4－8mM。2）模板的浓度：如果研究者是进行首次实验，那么应选择一系列稀释浓度的模板来进行实验，以选择出最为合适的模板浓度，如果条件困难，也至......阅读全文
Real-time PCR
实验概要The exponential amplification via reverse transcription polymerase chain reaction provides for a highly sensitive technique in which a very low
Real-Time or Kinetic PCR
The DNA Facility houses the “real-time” or kinetic PCR instrument, the Applied Biosystems Model 7700 sequence detection system (the TaqMan instrument
实时定量PCR（Real-time quantitative PCR）
mRNA表达的研究 微小残留病变的检测 肿瘤耐药基因表达的研究 病毒感染的定量监测Vs普通PCR，RT-PCR的优势 采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多 。 扩增产物的检测在PCR扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由 仪器 自动完成，因此整个检测所 需的时
Real-Time PCR实验流程
实验试剂Total RNA Kit ：Omega：(Cat.No．R6834)First Strand cDNA Synthesis Kit：GeneCopoeia(Cat.No．C0210A)2xAllinOneTMQ-PCRMix：GeneCopoeia（cat.No．D0101A)Primer
RT-PCR、QPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR你真的区分的开吗？
多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开？有多少同学还在犯晕？今儿这贴，师兄就带你区分区分，拨开那扇 PCR 迷雾。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR(reverse transcr
real-time PCR体系的优化
实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的朋友有所帮助。1、基本参数的优化：1）MgCl2的浓度：在PCR反应中，MgCl2的浓度对酶的活
Real-time PCR 基础知识
理论基础 聚合酶链式反应作为一种革命性的方法在生物学研究的历史中占据了重要的地位。以此为基础发展出包括real-time PCR在内的多项应用技术。自诞生后real-time PCR技术持续发展，从简单的增扩到整个PCR过程，real-time PCR表现出比PCR更敏感、更明确的定量分析特
real-time PCR 数据分析
无论所使用的real-time PCR是何种型号，正确的数据分析对于获得有效的实验结果都是至关重要的。这里介绍有关real-time PCR数据分析的知识。 在讨论基本分析过程之前，先介绍如何设计一个好的实验。如果你是自己设计的引物和探针，那有助于下一步的工作。但是在有些情况下，人们使用出版文献上的
Real-time PCR与RT-PCR的区别
实时荧光定量PCR原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。1．内标在传统定量中的作用由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重
实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）实验流程
一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录)不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总rna的提取过程中，注意避免mRNA的断裂;取2u