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一、材料、试剂和仪器1、材料：植物总RNA 5-10μg2、试剂：1）加样运载缓冲液（Loading buffer）50% 甘油1mmol/L EDTA （pH 8.0）0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2）10×TAE Buffer3）5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPs （pH7.0）40mmol/L乙酸钠5mmol/L DETA（pH8.0）4）甲醛，甲酰胺3、仪器：电泳装置，紫外透射观测仪二、实验程序1、甲醛变性的琼脂糖（Agarose） 凝胶的配制在250mL的锥形瓶中准确称量2g Agarose （Sigama），再加20mL 10×TAE Buffer，144mLDEPC处理过的双蒸水，微波炉中化胶，待冷却至50-60℃加EB至终浓度≤0.5μg/mL。在通风橱中加入36 mL甲醛，放置一段时间以减少甲醛蒸汽。2、RNA的甲醛变性电泳1） 样品制备RNA总量10μg5×甲醛凝胶电泳缓冲液4μl......阅读全文
RNA的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等。甲醛变性电泳检测RNA完整性一、材料、试剂和仪器1 材料: 植物总RNA 5-10μg2 试剂:1）加样运载缓冲液（Loading buffer），50% 甘油，1mmol/
实验材料 模板 DNA 或质粒 试剂、试剂盒 TE 异
实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE 异丙醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5×转录缓冲液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-饱和的酚氯仿异戊醇 DN
利用 DNA 聚合酶 I 的大片段（Klenow 酶）的 3＇— 5＇外切酶活性将 3＇黏性末端转化成平末端。具体方法是在体外转录体系尚未加入核苷酸和 RNA 聚合酶时，加入 Klenoow 片段 (终浓度为 5U/ug)，于 22℃ 孵育 15mim, 然后再加入核苷酸混合物和RNA 聚合酶实验材
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提RNA纯度高完整性好较适合纯化mRNA，
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较适合纯化mR