定点突变技术：从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常熟悉：比如野生型的绿色荧光蛋白（wtGFP）是在紫外光激发下能够发出微弱的绿色荧光，经过对其发光结构域的特定氨基酸定点改造，现在的GFP能在可见光的波长范围被激发（吸收区红移），而且发光强度比原来强上百倍，甚至还出现了黄色荧光蛋白，蓝色荧光蛋白等等。定点突变技术的潜在应用领域很广，比如研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性，改造启动子或者DNA作用元件，提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构，......阅读全文
DNA定点突变实验
DNA定点突变可用于：（1）研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性；（2）改造启动子或者DNA作用元件；（3）提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构，以及药物研发、基因治疗等等方面。实验方法原理定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以
DNA定点突变实验
实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。单点突变的原理是从常规E.coli中经纯化试剂盒(Miniprep)或者氯化铯纯化抽提得到质粒。设计一对包含突变位点的
DNA定点突变实验
DNA定点突变实验 实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方
基因定点突变知识
实验原理基因定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法改变目的基因的序列，包括碱基的插入、缺失、点突变等。基因定点突变是基因研究中比较常用的方法，可以短时间内研究目的DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。定点突变需要设计特定的突变引物。引物长度一般为25-45 bp，建议选择30-35bp长度
定点突变技术：从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究
定点突变技术——从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我
定点突变技术――从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我
基因定点突变step－by－step
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
基因定点突变step－by－step
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
基因定点突变step－by－step
本文先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上： 在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。 实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做： 第一 我们吊出来的基因有点突变
快速－PCR－定点突变实验
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用
快速－PCR－定点突变实验
实验方法原理 这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有
快速－PCR－定点突变实验
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2.加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用 P
快速－PCR－定点突变实验
试剂、试剂盒 ATPdNTP 溶液SDM 缓冲液Taq DNA 聚合酶克隆化的 Pfu DNA 聚合酶Taq Extender PCR 添加剂Dpn I 限制性内切酶T4 DNA 连接酶模板 DNAdsDNA 质粒LB 琼脂平板仪器、耗材 FALCON 2059 管子或替代物热循环仪水浴或适当的加热
知识分享：基因定点突变
实验原理 基因定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法改变目的基因的序列，包括碱基的插入、缺失、点突变等。基因定点突变是基因研究中比较常用的方法，可以短时间内研究目的DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。 定点突变需要设计特定的突变引物。引物长度一般为25-45 bp，建议选择3
定点诱变实验——利用PCR引物点突变
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶klenow限制性内切酶仪器、耗材水浴锅离心机培养箱实验步骤1. 制备模板（见基本方案，步骤1和2） 2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。 3. 扩增模板DNA（基本方案，步骤4和5），在最后一次延伸结束后，加5 U 的klenow酶，30℃保温
Nature－Methods：大规模定点突变的新方法
定点突变是序列-功能研究中不可或缺的工具。然而，传统的方法能力有限。华盛顿大学的研究人员开发出一种新方法，能够以大规模并行的方式开展单个氨基酸的定点突变。这项成果于1月5日发表在《Nature Methods》杂志上。 目前的定点突变方法能力有限，每次只能靶定几个碱基，且操作繁琐，成本高昂。为
氯霉素乙酰转移酶的定点突变介绍
为了研究反应中底物识别，催化和特殊侧链交互作用对蛋白结构各方面的影响，包括对其稳定性和反应活性的影响，CATⅢ己经有超过60种的定点突变类型。特殊的点突变类型有助于研究每一个酪氨酸残基在配体结合时荧光发生改变的过程中所起的作用，有助于进一步的阐明CATⅢ和氯霉素交互作用的NMR结果。对cat基因
闪络型故障定点，定点的同时可以探测路径
闪络型故障定点，定点的同时可以探测路径。l配合音频信号发生器，进行音频感应测试，可以迅速准确地探测电缆路径，进行低阻故障定点，并能进行电缆的鉴别和深度测量。特 点l功能完善，可对各种电缆故障进行定点和确定电缆路径。l测量精度高，高阻故障定点和路径探测的误差均不超过0.2米，低阻故障定点误差不超过2
闪络型故障定点，定点的同时可以探测路径。
闪络型故障定点，定点的同时可以探测路径。 l配合音频信号发生器，进行音频感应测试，可以迅速准确地探测电缆路径，进行低阻故障定点，并能进行电缆的鉴别和深度测量。 特 点 l功能完善，可对各种电缆故障进行定点和确定电缆路径。 l测量精度高，高阻故障定点和路径探测的误差均不超过
定点诱变实验
基本方案 利用PCR引物点突变 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
定点诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE寡核苷酸引物质粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蜡油无水乙醇仪器、耗材 离心管热循环仪离心机实验步骤 1. 利用突变区两侧的限制性内切酶位点将待诱变的DNA片段亚克隆进高拷贝数的载体中。 2. 用小量制备的质粒提取模板DNA，用TE缓冲液重悬100 ng DNA至终浓
遗传发育所在水稻中建立基因定点替换及定点插入体系
CRISPR/Cas9技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命，该技术已经广泛应用于包括农作物在内的各种生物体的基因组编辑。科学工作者利用该技术，创造了大量的植物内源基因功能缺失的突变体，为植物的功能基因组学研究和应用研究做出了巨大的贡献。然而对植物内源基因进行更为精确地修饰，如基因定点替换以
猎鹰捕食：盯住固定点
一只斯温氏鵟在美国新墨西哥州的一个蝙蝠洞里攻击巴西犬吻蝠群。 图片来自：Caroline Brighton 一只斯温氏鵟在美国新墨西哥州的一个蝙蝠洞里攻击巴西犬吻蝠群的合成帧序列，白线连接的是这只猛禽与所捕获猎物，这条线随时间推移方向不变，说明蝙蝠的位置是不变的。图片来自：Caroline
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计：每条引物都要携带有所需的突变位点，引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少，一般为12个循环。反应体系：10x pyrobest Buffer 5 uldNTP Mixture(10mM) 1ul模板DN
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计：每条引物都要携带有所需的突变位点，引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少，一般为12个循环。反应体系：10x pyrobest Buffer 5 uldN
上海探索“定时定点”投放垃圾
上海近日实施的《关于建立完善本市生活垃圾全程分类体系的实施方案》 转变思路，首次提出鼓励居住小区推行生活垃圾“定时定点”投放。在指定的时间和地点才能投放垃圾，如此不方便，能行吗？ 原因：乱扔可明确追责 对于定时定点投放，崇明堡镇虹宝社区居委会支部书记黄青愉一开始很担心。这个1500多人规模的社
定点“爆破”的纳米颗粒药物
以纳米药物制药剂为基础的纳米微粒药物输送技术是当今药学的重要发展方向之一。虽然纳米技术问世不久，但在医药领域，致力于分子水平上的研究已有较长历史。本文介绍利用纳米颗粒为载体实现对药物的选择性释放，用于肺肿瘤的治疗。 纳米粒子作为载体的药物可以用来防治肺癌：来自德国的NIM和
帕金森可微创“定点清除”
家住在福州市台江区的蔡依姆，患帕金森症已经11年，不但拿东西时手会明显颤抖，平时手放在床上时也抖得厉害，加上腿脚僵硬，让她苦不堪言。近日，蔡依姆在福州空军476医院神经外科进行了微创“DBS联合立体定向疗法”手术治疗，“定点清除”异常兴奋的神经核团，5月16日，术后恢复期的蔡依姆手腿也利索了，
关于基因定点诱变的概述
对于任何一种遗传学研究，尤其是有关基因的结构与功能的分析，突变都是最基本的手段。经典的方法是，应用能够修饰DNA分子的化学诱变剂或物理诱变剂处理生物体。此类诱变方法虽然已得到了广泛的应用，获得了大量的突变体，但亦存在着诸多的不便之处。 第一、经受诱变剂处理的生物体，它的任何基因都有可能发生突变