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焦磷酸测序(Pyrosequencing)实验技术及方法

先进的基于焦磷酸测序(Pyrosequencing)的PSQ96 MA技术平台,能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外,还提供短片段的测序服务(50-100 bp),适用于细菌和病毒分型等研究领域。基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点,完成96个样品的SNP分析仅需10分钟。整个实验过程(包括PCR扩增、单链分离、Pyrosequencing测序和数据分析)也只需3-4 小时。 PSQ96 MA配备有功能强大的SNP分析软件,可支持SNP位点的复合检测(在一个反应体系中最多可同时检测3个不同位置的SNP位点)。对于混合样品,则可准确测定特定SNP位点的基因型频率。 一.常规SNP检测样品要求 用户须提供足够量的基因组DNA样品,一般需200ng/样品/位点。 二.基于Pyrosequencing技术的甲基化检测服务 1.甲基化研究意义 DNA甲......阅读全文

DNA测序技术的现状和发展(三)

1.1.1 摩尔定律对454测序仪的影响454测序仪的迅猛发展不是因为我们想要Sanger测序仪小型化,而是因为新型奔腾芯片的出现以及摩尔定律法则给我们带来的希望。很明显,常规的人类基因测序项目会对我们处理测序技术的能力提出更高要求,这与我们对计算机处理能力的要求是一样的。不过,只有将计算机的电子管

焦磷酸测序在甲基化分析中的应用

  DNA甲基化是近年来研究的热点,因为越来越多的证据表明,它参与了胚胎发育、基因印迹等过程。同时,它在疾病发展中也起着举足轻重的作用。甲基化状态的改变被认为是引起癌症的一个重要因素,这种变化包括基因组整体甲基化水平的降低和CpG岛局部甲基化水平的异常升高,从而导致基因组的不稳定(如染色体的不稳定、

焦磷酸测序(Pyrosequencing)原理

  焦磷酸测序  技术(pyrosequencing)是一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适

焦磷酸测序技术原理及应用

  焦磷酸测序(Pyrosequencing)技术   焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测

焦磷酸测序技术原理及应用

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成

一文看全!史上59家测序仪公司的“争霸战”

  公司:DNAe (DNA Electronics)  网站:https://www.dnae.com  简介:2003年成立,英国。  核心技术:基于电微流体半导体(CMOS)的合成法测序技术  是否属于单分子测序技术:否  公司产品:LiDia测序平台  描述:使用离子敏感场效应晶体管(ISF

DNA甲基化检测技术全攻略

近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术,少说也有十几种。大致可以分为两类:特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析,后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。一、特异位点的甲基化检测1. 甲基化特异性PCR(MS-PCR)这种方法经济实用,

五花八门的DNA甲基化检测(上)

  近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术,少说也有十几种。大致可以分为两类:特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析,后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面生物通给大家介绍一些常用的方法。   特异位点的甲基化检测   甲基化特异性PCR(MS-PC

下一代测序技术将改变生物学现状

  新一代非基于“桑格技术”的基因测序法以空前的快速测序速度问世了,它为人类带来了重大的科学成果和先进的生物学应用软件。然而,要研发出新一代基因测序法,必须克服30年来以桑格技术为基础的惯性思维。    1977年,Fred Sanger 和Alan R. Coulson发表了两篇关于快速测序技

DNA甲基化检测技术全攻略

近年来涌现出不少 DNA 甲基化的检测技术,少说也有十几种。大致可以分为两类:特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析,后者也称为甲基化图谱分析 (methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性 PCR (MS-PCR)

DNA甲基化检测技术全攻略

近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术,少说也有十几种。大致可以分为两类:特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析,后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。一、特异位点的甲基化检测1. 甲基化特异性PCR(MS-PCR)这种方法经济实用,

用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

试剂、试剂盒 去离子蒸馏水二硫苏糖醇dNTP 和 ddNTP标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液甲酰胺上样缓冲液测序酶稀释缓冲液测序酶反应缓冲液含MgCl2测序酶酵母无机焦磷酸酶寡核苷酸引物模板 DNA放射性化合物仪器、耗材 离心机和转头微量离心管或微量滴定板实验步骤&nb

用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应

            试剂、试剂盒 去离子蒸馏水 二硫苏糖醇 dNTP 和 ddNTP 标记混合液和 ddNTP 延伸 终止混合液

盘点:分子诊断常用技术50年的沿革与进步

  一、基于分子杂交的分子诊断技术  上世纪60年代至80年代是分子杂交技术发展最为迅猛的20年,由于当时尚无法对样本中靶基因进行人为扩增,人们只能通过已知基因序列的探针对靶序列进行捕获检测。其中液相和固相杂交基础理论、探针固定包被技术与cDNA探针人工合成的出现,为基于分子杂交的体外诊断方法进行了

一文读懂分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术

  分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料,用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常,从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常,以确定受检者有无基因水平的异常变化,对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗

一文读懂分子诊断常用技术

  分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料,用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常,从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常,以确定受检者有无基因水平的异常变化,对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗

解读《肿瘤个体化治疗检测技术指南》:9大检测技术

  肿瘤的个体化治疗基因检测已在临床广泛应用,实现肿瘤个体化用药基因检测标准化和规范化,是一项意义重大的紧迫任务。  为进一步提高肿瘤个体化用药基因检测技术的规范化水平,7月31日,国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会,在广泛征求意见的基础上,制订了《肿瘤个体化治疗检测技术指南(试行)》。  

多个序列突变的筛查-HRMA(三)

前序列筛查    使用HRMA进行前序列筛查,特别是对于大基因可以节省很大的成本;Provaznikova 等[2008]报道对于MYH9基因可以避免85%的测序。在例中的DMD基因,第79个外显子需要分析(Al-Momani 等),假定每个外显子测序需要1

454高通量测序——研究土壤微生物的新手段

  在陆地生态系统中,在土壤中生活有数量庞大的微生物种群,包括原核微生物如细菌、蓝细菌、放线菌及超显微结构微生物, 以及真核生物如真菌、藻类( 蓝藻除外) 、地衣等。它们与植物和动物有着明确的分工,主要扮演“分解者”的角色,几乎参与土壤中一切生物和生物化学反应,担负着地球C、N、P、S 等物质循环的

第一代DNA测序技术

第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格(Sanger)和考尔森(Coulson)开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆(Maxam)和吉尔伯特(Gilbert)发明的化学法(链降解). 并在1977年,桑格测定了第一个基因组序列,是噬菌体X174的,全长5375个碱基[1]。自此,人

谢晓亮:从单细胞研究到高通量测序

  2011年7月第八期《自然—方法学》刊登了Monya Baker撰写的一篇人物特写,详细介绍了在当期发表的论文 “Fluorogenic DNA sequencing in PDMS microreactors”的主要作者哈佛大学谢晓亮教授的高通量测序技术。全文翻译如下:  在科学界,

用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验

本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法,采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序(有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备,请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕

双脱氧法DNA测序实验

实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1.  对于每个单链模板:将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中(1)0.5 pmol 单链DNA模板(2)0.5 pmol 引物(3)1 μl 10×测序酶

双脱氧法DNA测序实验

测序酶进行标记测序反应 α-标记核苷酸进行热循环测序反应             实验材料

下一代测序技术将改变生物学现状(一)

新一代非基于“桑格技术”的基因测序法以空前的快速测序速度问世了,它为人类带来了重大的科学成果和先进的生物学应用软件。然而,要研发出新一代基因测序法,必须克服30年来以桑格技术为基础的惯性思维。1977年,Fred Sanger 和Alan R. Coulson发表了两篇关于快速测序技术的论文[1

454高通量测序-研究土壤微生物的新手段

在陆地生态系统中,在土壤中生活有数量庞大的微生物种群,包括原核微生物如细菌、蓝细菌、放线菌及超显微结构微生物, 以及真核生物如真菌、藻类( 蓝藻除外) 、地衣等。它们与植物和动物有着明确的分工,主要扮演“分解者”的角色,几乎参与土壤中一切生物和生物化学反应,担负着地球C、N、P、S 等物质循环

454高通量测序——研究土壤微生物的新手段(二)

二、高通量测序在土壤微生物研究中的应用 1.1 研究土壤微生物的物种多样性 微生物物种多样性主要从对微生物类群即细菌、真菌和放线菌这三大类群的数量及其比例组成来描述微生物多样性,或者按照微生物在生态系统中的作用将其划分成不同的功能群(function group),通过某

下一代测序技术将改变生物学现状(二)

最新的新一代测序仪操作只需一个人,24小时内可产生与几百台桑格毛细管测序仪同样多的序列数据。此外,样品中DNA损伤与常温贮藏的状态以及新一代测序误差等因素往往超过了序列变异,因此很难确定样品来源于现代人类还是古穴人。相比较而言,断言长毛象的某一特定顺序是来源于古代标本,而不是现代污染物更容易,因为现

用PCR进行基因分型

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样,我第一次用PCR做基因分型(genotyping)时觉得见效很快,不再需要等几天才能看到结果,不再需要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步,RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化,甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白

用PCR进行基因分型-1

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样,我第一次用PCR做基因分型(genotyping)时觉得见效很快,不再需要等几天才能看到结果,不再需要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步,RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化,甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白