人乳腺癌阿霉素耐药细胞株检测步骤

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株检测步骤:1. 将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体2. 在微定量板上吸附组蛋白体3. 加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合4. 加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合5. 加酶的底物,测光吸收制检测原理:细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。培养细胞的常规观察: 细胞接种或传代以后,实验者每天或至多间隔1~2d,要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化,做换......阅读全文

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株检测步骤

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株检测步骤:1.  将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体2.  在微定量板上吸附组蛋白体3.   加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合4.   加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合5.   加酶的底物,测光吸收制检测原理:细胞发生凋亡或坏

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株细胞特性

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株细胞特性:1)组织来源于实验动物的眼球。2)细胞鉴定:广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式:扁平的椭圆形、梭形或不规则形,不规则细胞,贴壁培养。运输和保存:视

HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mLHepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株。悬液的冻存管在  37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL  培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入

如何构建耐药细胞株?

肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤治疗失败的重要因素之一,成为目前阻碍肿瘤治疗的绊脚石。因此,探索肿瘤细胞产生耐药的原因以及如何改善肿瘤细胞对化疗药物耐药仍是目前研究的热点和难点。肿瘤细胞耐药的产生是一个复杂的过程,它的机制广泛牵涉到药物代谢学、病理学、生理学等多个学科,这就决定了肿瘤细胞对化疗药物

HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株注意事项

1. 上述操作方案的数据可作为参考,实际操作已实验室配备的耗材为准,2. 冻存时含 10%DMSO,事先加 9ml 培养液是为了稀释 DMSO,理论上 1%DMSO对细胞性3. 隔着 PE 手套能有效防止水浴过程中导致污染4. 重悬的体积只是作为参考,具体的根据需要可进行调整5. 由于复苏过程中已经

HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株复苏操作流程

1. 准备工作,开水浴锅,预热试剂,超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置2. 紫外照射后风机吹 10min 后,酒精擦拭台面,放入试剂和离心管,取 15ml 离心管,加入 9ml 培养液3. 在液氮罐中取出细胞,先拧松放液氮,再拧紧,将冻存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后

HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株培养注意事项

1. 收到HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株。后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。2. 仔细阅读HepG2/ADR细胞人细胞阿霉素耐药株。说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由

体内耐药细胞株的建立实验

体内耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身生物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp(或P-170)糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受。实验方法原理细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身药物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受,随着药物浓度的递增,其耐受

体内耐药细胞株的建立实验

实验方法原理 细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身药物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受,随着药物浓度的递增,其耐受程度逐渐加强。实验材料 小鼠瘤株试剂、试剂盒 肝素生理盐水仪器、耗材 离心机实验步骤 一、材料准备1.  动物选择:根据欲建立的耐药细胞株,选择合适的动

人白血病耐药细胞株传代培养及注意事项

人白血病耐药细胞株安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后,在倒置镜下zui好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。具体步骤如下:(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放

概述肿瘤细胞多药耐药的产生机制

  1、 MDR基因及P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)  MDR基因在人类有二种:MDR1和MDR2,其中MDR1与肿瘤的多药耐药有关,MDR2的功能不清楚,但MDR1和MDR2基因序列具有较高的同源性。人类MDR1基因位于第7号染色体长臂上,含有28个外显子,内含子与外显子交

肿瘤细胞多药耐药的产生机制

1、 MDR基因及P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)MDR基因在人类有二种:MDR1和MDR2,其中MDR1与肿瘤的多药耐药有关,MDR2的功能不清楚,但MDR1和MDR2基因序列具有较高的同源性。人类MDR1基因位于第7号染色体长臂上,含有28个外显子,内含子与外显子交界符合经

小鼠杂交瘤细胞株培养步骤

小鼠杂交瘤细胞株培养步骤:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下

小鼠杂交瘤细胞株培养步骤

小鼠杂交瘤细胞株培养步骤:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下

5637细胞|-5637细胞系-培养步骤

  5637细胞| 5637细胞系 培养步骤   产品名称:5637细胞   中文名称:人膀胱癌细胞;5637   规格:T25   供应商:上海慧颖生物科技有限公司   复苏周期:10个工作日左右   培养步骤:   1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇

PI3K/Akt/mTOR信号通路

特异性阻断法 mTOR抑制剂作用法 样本比较法             实验方法原理 通过特异性阻断PI3K和mTOR,观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/

PI3K/Akt/mTOR信号通路

特异性阻断法 mTOR抑制剂作用法 样本比较法             实验方法原理 通过特异性阻断PI3K和mTOR,观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/

PI3K/Akt/mTOR信号通路

实验方法原理 通过特异性阻断PI3K和mTOR,观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路活性及生物学行为的改变,探讨相关的分子机制。实验材料 HepG2人肝癌细胞Hep3B人肝癌细胞株人正常肝细胞株QSG-7701试剂、试剂盒 LY294002Rapamycin阿霉素仪器、

中科院研究发现超声给药或可逆转肿瘤多药耐药

  12月17日,记者从中科院深圳先进技术研究院获悉,该院医工所郑海荣研究组对脂质体—微泡复合物携载化疗药物阿霉素,在超声激励下对多药耐药型乳腺癌的逆转作用及机制进行探讨并取得进展,相关成果在线发表于《控释杂志》。   该研究对于发展新型超声给药及治疗技术具有重要价值。其研究表明:载药微泡复合物联

PI3K/Akt/mTOR信号通路_特异性阻断法

PI3K/Akt/mTOR信号通路可以:(1)诱导缺氧诱导因子1的表达和活性;(2)作为细胞内非常重要的信号转导途径;(3)在细胞的生长、存活、增殖、凋亡、血管生成、自吞噬等过程中发挥着极其重要的生物学功能。实验方法原理通过特异性阻断PI3K和mTOR,观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/Ak

乳腺癌新辅助疗法紫杉醇和阿霉素可促进癌症转移

  目前临床上,肿瘤的有效治疗手段一直以手术切除为主,外科手术之后的治疗均称为辅助治疗,其目的是通过术后放疗化疗消灭残存的微小转移病灶,减少肿瘤复发和转移的机会,提高治愈率。新辅助治疗(neoadjuvant therapy)则是指在手术治疗前予以的治疗措施,主要包括化疗和放疗,其目的是减小肿瘤的体

重大突破!纳米粒子竟可有效治疗卵巢癌!

  肿瘤的高发和难治性,已成为世界公认的卫生难题,并对人类生命健康和社会生产造成了巨大威胁。而在生殖系统肿瘤中,卵巢癌的发病率和死亡率最高。每年,全世界估计有239000例卵巢癌新增病例,其中152000人死于该病;而在美国,每年至少有20000名妇女被诊断为卵巢癌。  肿瘤复发和转移是70%的晚期

人PBMC调节T细胞检测操作步骤

1、制备PBMC,并调整细胞浓度至107/ml。2、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液,细胞数约为1x106个。3、按照细胞表面抗原染色方法标记CD4和CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量(一般来说是20ul,可能随批次有差异)。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本

人如何感染严重耐药结核?

肺结核(即肺部结核,最常见的感染部位)患者通常具有传染性,并可通过咳嗽、打喷嚏或只是交谈传播该病,因为这会驱使结核细菌扩散到空气中。人只要吸入少量这些病菌,即受到感染(虽然只有少数人感染结核病)。有时候如果这些细菌来自耐药结核患者,它们早已具有耐药性。形成耐多药结核或严重耐药结核的第二个途径是患者自

先进院超声给药逆转肿瘤多药耐药研究取得新进展

  最新发布的2014年1月国际学术期刊《控释杂志》(Journal of Controlled Release)发表了中国科学院深圳先进技术研究院生物医学与健康工程研究所郑海荣研究组的最新超声给药成果:脂质体-微泡复合物携载化疗药物阿霉素在超声激励下对多药耐药型乳腺癌的逆转作用及机制探讨。

上海药物所发现非编码miRNA抗肿瘤耐药的功能和机制

  肿瘤的耐药性是国际上抗肿瘤药物研究的难题。根据美国国家癌症协会发布的研究数据:90%以上肿瘤患者治疗失败都与耐药相关。因此研究肿瘤耐药的机制、寻找新的抗肿瘤靶点以及研发新型抗肿瘤药物一直是全球关注的热点。MRP(Multidrug Resistance associated Protein,多药

乳腺癌耐药竟然和亮氨酸量有关?

  大约八分之一的美国女性一生中会患上乳腺癌。绝大多数乳腺癌都依靠雌激素生长。雌激素受体阳性(Estrogen-receptor positive,ER+)乳腺癌经常使用药物他莫西芬治疗,这种药物可以阻断激素对肿瘤的作用。然而,许多肿瘤最终对他莫西芬产生耐药性,从而导致癌症复发或转移。图片来源:Na

乳腺癌靶向治疗耐药性的原因

  HER2膜蛋白在某些类型的乳腺癌中发挥着特殊的作用: HER2水平升高,可驱动无限制的细胞增殖。HER2定制的、以抗体为基础的疗法,旨在阻止癌细胞的生长。然而,有三分之二的HER2阳性乳腺癌患者,会对HER2靶向药物发展出耐药性。这一原因尚不清楚。最近,有研究人员发现,HER2二聚物,似乎没有出

microRNA-芯片联合应用探究胃癌细胞株原发性耐药分子机制

  microRNA 芯片与表达谱芯片的联合应用——探究胃癌细胞株的原发性耐药的分子机制    药物耐受是肿瘤治疗领域的一大难题,一般分为两种类型:其一为原发性耐药,即先前未经治疗的肿瘤细胞天生就对某种药物不敏感;其二是获得性耐药,指经过治疗的肿瘤细胞再次接受该药物治疗时变得不敏感。 目前,

细胞株HLAA*02检测方法

方法1、抗体测定:研究对象取200μl新鲜抗凝全血,每管100μl加入流式细胞仪检测管中,再加入2ml红细胞裂解液反应12min后离心,弃上清液,磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)洗细胞两次,其中反应管加入鼠抗人HLA-A*02抗体××μl(达科为公司),4