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培养细胞的老师们都知道细胞的生命是极其脆弱的在培养过程中有哪些行为是比较伤害细胞的呢？在培养贴壁细胞过程中消化过程在一定程度上是对细胞的一种折磨但是又不得不进行这个过程所以如何做好细胞消化善待细胞们是我们一定要了解的步骤~ 胰酶的作用原理胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。 使用胰酶时需注意的细节问题在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造......阅读全文
培养细胞的老师们都知道细胞的生命是极其脆弱的在培养过程中有哪些行为是比较伤害细胞的呢？在培养贴壁细胞过程中消化过程在一定程度上是对细胞的一种折磨但是又不得不进行这个过程所以如何做好细胞消化善待细胞们是我们一定要了解的步骤~ 胰酶的作用原理胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个
适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl
细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，
细胞原代培养可以：（1）为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段；（2）为传代培养创造条件；（3）服务于临床实践，用于药物筛选等。实验方法原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、
一、原理与目的提取制备酶的经典方法，多采用硫酸铵分级沉淀，胰酶在75%饱和度硫酸铵中沉淀，其它杂蛋白一般在10%硫酸铵饱和度下被沉淀而除去。经此多次提取，最后在PH8.0硼酸缓冲液中得到结晶。胰酶在PH3.0时最稳定，可在低温下储存较长的时间而不失活；低与此PH酶易变性；高于PH5时，酶易自溶而失活
小鼠肝细胞原代培养可用于：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM无血清DMEM培养基
一般说来，胰酶消化时间过长，对细胞会造成损伤，影响其活力，甚至细胞破碎。如果胰酶消化时间过长，就要注意在加入胰酶消化前先用PBS冲洗一下培养瓶，这样可提高胰酶消化能力，缩短消化时间；另外，可以在配制胰酶时加入EDTA，这样就更易消化细胞。如果细胞长久不贴壁，可试用下面的方法：1、将细胞接种到培养后，
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca2+, Mg2+和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 ℃ 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反
不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反