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上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好。......阅读全文
上样也有干法和湿法之分： 干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用
干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。 干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。 湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶
上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴
、柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些:柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为3-6毫米，柱长为1-4米。 2、柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点
一、硅胶纯度： 硅胶纯度对峰形有很大液相，硅胶杂质和残留的金属离子会影响样品的峰形，如果硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。 二、颗粒形状及粒径： 球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀;不规则的颗粒柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易形成谱带展宽;平均颗粒直径，粒径
我们可以设想这样一个场景，在一条湍急的河流中倒入一瓶墨水，墨水首先会是一个小小的点，渐渐顺水流而行一点点扩散，而到下游的时候肯定已不再是一个点，而是一个宽宽的谱带了。这个现象完全适用于HPLC的分析，试想样品由进样器起步为一个小小的点，流经输液管路和色谱柱，当到达检测池时必然也像墨水一样不可避免的有
影响因素 (1)柱长 有机小分子和肽类的分辨率随柱长的增加而增加．但是柱长增加并不能使蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率显著增加．它们在较短的柱子上往往也有很好的分离效果。 (2)流动相的流速。 有机小分子和肽类的分辨率对流动相流速非常敏感。而蛋白质和核酸等生物大分子的分辨率则不然。流速越小
水分、烃类和氧气对色谱分析的影响 在色谱分析过程中，存在气源管路及气瓶中的水分、烃类、氧会产生噪声、额外峰和基线毛刺，尤其对特殊检测器（如ECD\PID）影响更为明显，极端情况下还会破坏色谱柱。 通常水分存在于气体容器的表面和气路管路内，其不仅影响组分的分离，还会使部分固定相或硅
一、色谱柱柱温的初始温度 1.基本是zui容易也是zui快做到的方法，一般来说初始温度越低的话，分析物凝结的越好 2.初始温度如果设在比zui快出峰分析物的沸点低50℃左右，温度保持的时间基本就是非分流的保持时间 二、色谱柱“固定相比例” 越低的固定相比例，意味着越厚的膜厚，膜越厚样品和溶
一、色谱柱柱温的初始温度 1.基本是zui容易也是zui快做到的方法，一般来说初始温度越低的话，分析物凝结的越好 2.初始温度如果设在比zui快出峰分析物的沸点低50℃左右，温度保持的时间基本就是非分流的保持时间 二、色谱柱“固定相比例” 越低的固定相比例，意味着越厚的膜厚，膜越厚样品和溶