免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标记抗体,干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体,则表明抗原标本是已知的,待检血清为第一抗体,其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体,同于血清球蛋白有种的特异性,如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应,因此,制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。......阅读全文
Immunofluorescence Technique (Spector Lab) protocol for immunofluorescence on cells Immunofluorescence Protocol (Walter Steffen) Methanol
实验方法原理 固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。 实验材料 细胞培养在盖玻片 产生一抗种属的二抗
方案16.11 间接免疫荧光 实验方法原理 固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。 实验材料 细胞培养在盖玻片产生一抗种属的二抗猪血清或其他封闭剂D-PBSA 试剂、试剂盒 新鲜制备的固定剂用含10%的FBS培养液封固剂 实验步骤 1
基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 l 磷酸盐缓冲盐
免疫荧光技术 1) 直接法 1.标本经固定后,PBS洗涤3×3分钟。 2.加荧光素标记的抗体,湿盒内37℃孵育50分钟。 3.PBS洗涤3×3分钟。 4.0.1%伊文氏兰复染。 5.PBS洗3次,蒸馏水洗2次,每次3分钟,以除去NaCl结晶。 6.缓冲甘油封片,镜检。 2)
实验方法原理 固定细胞,顺序加入一抗和二抗,通过 UV 光观察。 实验材料 细胞培养在盖玻片产生一抗种属的二抗猪血清或其他封闭剂D-PBSA 试剂、试剂盒 新鲜制备的固定剂用含10%的FBS培养液封固剂 实验步骤 1. 用 D-PBSA 洗涤长有细胞的盖玻
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
免疫荧光(immunofluorescence technic)Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 直接法 将
实验方法原理 直接法是以荧光素标记的抗体直接与标本内的抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。根据荧光的分布位置及强度,确定相应抗原的存在与否及其所在部位。实验材料 抗体试剂、试剂盒 PBS伊文氏兰仪器、耗材 显微镜实验步骤 1. 标本经固定后,PBS洗涤3×3 分钟;2. 加荧光素标记的抗体,湿