层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在精确分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。......阅读全文
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。
层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。
层析柱的质量关键要考虑以下几点: 两端的4F塞是否密封质量好,中间的玻璃管的透明度以及耐压度, 是否有相应的转换接头来控制进料高度,
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例: 1.吸附剂的处理及柱子装填 将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵入溶剂,至溶剂流出止。 2.上样
1、压力 液相色谱柱(尤其是分析性高效液相色谱):压力较高,一般为10-20Mpa 层析柱:一般为常压,或使用真空泵(0.1Mpa左右) 2、填料 液相色谱柱:粒径较小(常规5-20um) 层析柱:粒径较大 3、分离度 由第二项决定,粒径越小,单位长度下理论塔板数越高 液相色谱柱
规格 层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高
实验材料 用于质谱分析的蛋白质或多肽样品 试剂、试剂盒 乙腈(HPLC级)甲醇基质溶液三氟乙酸 仪器、耗材 平头镊子GELoader 移液吸头MALDI-MS板移液吸头Poros R1、Poros R2 或 Oligo R3 层析树脂注射器 实验步骤
介质: Q-HP,体积为2L, 缓冲液1为0.4M/L NaCl, 缓冲液2为0.8M/L NaCl 柱子:SAC200*500(利穗) 设备为 AKTA Polit(GE)