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共沉淀方法的介绍

共沉淀(coprecipitation),一种沉淀从溶液中析出时,引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一,主要原因有表面吸附,混晶,包埋等。 共沉淀分离法是富集痕量组分的有效方法之一,是利用溶液中主沉淀物(称为载体)析出时将共存的某些微量组分载带下来而得到分离的方法。例如,在痕量存在下将硫酸钡沉淀时,几乎可载带下来所有的;当氯化银沉淀时,可将溶液中极微量的金收集起来,予以富集。[2]共沉淀分离富集—火焰原子吸收光谱法测定痕量金属元素的研究[3],基于分级共沉淀法制备锂离子电池正极材料[4],免疫共沉淀联合质谱分析筛选克罗恩病中Intelectin-1相互作用蛋白的初步研究[5];共沉淀在工业生产,医学蛋白研究等方面越来越发挥出它的价值。......阅读全文

共沉淀方法的介绍

  共沉淀(coprecipitation),一种沉淀从溶液中析出时,引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一,主要原因有表面吸附,混晶,包埋等。  共沉淀分离法是富集痕量组分的有效方法之一,是利用溶液中主沉淀物(称为载体)析出时将共存的某些微量组分载带下来而得到

免疫共沉淀实验操作方法介绍

  1.用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。  2.将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。  3.收集上清(约30 ml)并加入30μg的适当抗体,4℃摇动免疫沉淀物1 h。  4.加入

共沉淀的减少方法

共沉淀现象是玷污沉淀的主要因素,要通过沉淀反应在溶液中获得绝对纯的沉淀是不可能的。在重量分析中,总是设法减少共沉淀的影响。洗涤是经常采取的措施,它们虽然对减少混晶共沉淀无能为力,却可以有效地减少表面吸附和包藏引入的杂质。较少包埋另一种常用的方法是重结晶。减少或者消除同形混晶最好的办法是实现分离出杂质

免疫共沉淀的原理介绍

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),简称 Co-IP,其原理是当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来, 如果用蛋白质 X 的抗体 anti-X(通常称为 IP 抗体)将 X 特异地抓住并沉淀下来,那么与 X 在体内结合的蛋白质

免疫共沉淀的实验过程介绍

  (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C, 最大转速离心30 min后取上清;  (2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;  (3)

表面吸附共沉淀的相关介绍

  吸附共沉淀(adsorption coprecipitation)是由于沉淀表面吸附引起的共沉淀。  在沉淀晶格内部,正负离子按照一定的顺序排列,离子都被异电荷离子所饱和,处于静电平衡状态。而处于沉淀表面,棱角的离子电荷未达到平衡,它们的残余电荷吸引了溶液中带相反电荷的离子。沉淀颗粒越小,表面积

免疫共沉淀的优缺点介绍

  优点:  (1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;  (2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;  (3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。  缺点:  (1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;  (2)两种蛋白质的结合可能不是直接结

减少或消除共沉淀的方法

  共沉淀现象是玷污沉淀的主要因素,要通过沉淀反应在溶液中获得绝对纯的沉淀是不可能的。在重量分析中,总是设法减少共沉淀的影响。洗涤是经常采取的措施,它们虽然对减少混晶共沉淀无能为力,却可以有效地减少表面吸附和包藏引入的杂质。较少包埋另一种常用的方法是重结晶。减少或者消除同形混晶最好的办法是实现分离出

关于免疫共沉淀的实验流程介绍

  (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C,最大转速离心30 min后取上清;  (2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4℃缓慢摇晃孵育过夜;  (3)取1

关于免疫共沉淀的试验步骤介绍

  1. 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS;  2. 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶,0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶)  3. 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下,把悬液转到1.5EP管