科学家诠释“死酶”：存在即合理
假酶能够促使我们思考一个问题，实际我们并不那么了解激酶。 大约10年前，生物学家开始意识到存在部分如同“哑炮”般没有催化功能的人体酶，这一发现让他们大吃一惊。这种认知是一个冲击，人类生存离不开酶，因为酶能促进生物体系赖以生存的生物化学反应。那么这些酶为什么会失去催化功能呢?人体为什么会继续保留产生这些惰性蛋白质的能力呢? 2002年，这种被称为假酶(Pseudoenzyme)的酶被大规模发现。当时，一个研究小组正梳理最新的有效人类基因组序列图，以确定参与编码蛋白质激酶的所有基因。这些有重要作用的酶在细胞内分子电路中充当“开关”的角色，将磷酸基团转移到各种靶点以帮助控制范围广泛的活动，例如新陈代谢和细胞运动等。 研究人员通过实验发现，518种由DNA编码的人体蛋白激酶中，大约有10%至少缺乏催化磷酸盐转化的3种关键氨基酸中的1种，因此它们似乎是无效的。尽管之前这些无效酶就已为人所知，但是假酶的数量如此之大让人惊......阅读全文
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析—凝胶蛋白质激酶分析
试剂、试剂盒Tris-HClDTT盐酸胍尿素激酶分析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤1. 准备下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有试剂50 mmol/L Tris-HCl，室温（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 盐酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室温（p
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—蛋白质激酶C
试剂、试剂盒PKC 分析缓冲液组蛋白 HI 储存液磷脂酰丝氨酸甘油二油酸脂实验步骤1. 在冰浴的离心管内配制如下 20 μl 反应混合物：5X PKC 分析缓冲液 4 μl10 mg/ml 组蛋白 HI 储存液
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶
试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl β-酪蛋白
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪氨酸激酶
试剂、试剂盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析缓冲液实验步骤1. 制备酸变性的烯醇化酶从兔肌肉中纯化的烯醇化酶通常以硫酸铵沉淀或者悬液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速离心 5 分钟。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
肠激酶的酶学特点
肠激酶在体内激活胰蛋白酶原转化为胰蛋白酶, 由于肠激酶的轻链结构在人、牛和猪中保守, 其识别序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys在脊椎动物中也有很强的保守性, 且几乎所有被定序的胰蛋白酶原都具有4个天冬酰胺相连的特征, 此序列在其他的天然蛋白质上又非常罕见, 而肠激酶的活性中心有1个特殊的阳离
肠激酶的酶学特点
肠激酶在体内激活胰蛋白酶原转化为胰蛋白酶, 由于肠激酶的轻链结构在人、牛和猪中保守, 其识别序列Asp-Asp-Asp-Asp-Lys在脊椎动物中也有很强的保守性, 且几乎所有被定序的胰蛋白酶原都具有4个天冬酰胺相连的特征, 此序列在其他的天然蛋白质上又非常罕见, 而肠激酶的活性中心有1个特殊的阳离
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制 依赖环核苷酸的蛋白质激酶 蛋白质激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝胶蛋白质激酶分析
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制依赖环核苷酸的蛋白质激酶蛋白质激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝胶蛋白质激酶分析试剂、试剂盒ATP储存液 实验步骤一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
试剂、试剂盒 ATP储存液实验步骤 一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将
科学家诠释“死酶”：存在即合理
假酶能够促使我们思考一个问题，实际我们并不那么了解激酶。 大约10年前，生物学家开始意识到存在部分如同“哑炮”般没有催化功能的人体酶，这一发现让他们大吃一惊。这种认知是一个冲击，人类生存离不开酶，因为酶能促进生物体系赖以生存的生物化学反应。那么这些酶为什么会失去催化功能呢?人体为什么