罗氏甲基化捕获试剂创新甲基化研究方法

自2004年美国批准Vidaza (azacitidine)可用于血液疾病( 如MDS)的治疗以来,通过改变致病基因的表观遗传学特征进行疾病治疗的方法,为人们带来了疾病的新治疗策略。然而,由于表观遗传检测方法的局限,要确定基因的碱基在何处以何种程度被甲基化一直以来困扰着研究者,从而难以确定基因表观遗传学的改变也局限了表观遗传治疗方法的发展。尤其,要确定样本的甲基化比例而不仅仅是甲基化发生的位置,方法非常有限,二代测序的全基因组重测序可以解决这一问题,解析基因组水平精确的甲基化图谱,但这种检测的花费高和时间长。 最近在Nature Medicine上的一篇综述1总结了近来表观遗传检测技术方面的进展,一些新的技术可能使得这些类检测价格降低、也更加高效,通过这些技术有可能使得研究者更好的了解疾病的机制、进行相关药物的研发。 其中之一是来自罗氏NimbleGen的SeqCap Epi方法,通过这个方法可以针对......阅读全文

RNA甲基化测序

1、NSUN2影响m5C在HEK293细胞中整体分布情况NSUN2被报道是RNA甲基转移酶,能使tRNAs和mRNA发生m5C甲基化修饰。为了探究NSUN2对HEK293细胞mRNA m5C甲基化修饰的影响。作者利用CRISP/Cas9技术敲减NSUN2(NSUN2-/-HEK293细胞)后进行

DNA-甲基化测序常用方法

随着高通量测序技术(NGS)技术的发展,使我们能够从全基因组水平来分析 5’甲基胞嘧啶及组蛋白修饰等事件,由此能够发现很多传统的基因组学研究所不能发现的东西,这就是所谓的“DNA 甲基化测序”!DNA 甲基化测序方法按原理可以分成三大类: 1、重亚硫酸盐测序; 2、基于限制性内切酶的测序; 3、靶向

甲基化检测方法介绍

(1) 甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到

甲基化的检测方法

(1) 甲基化特异性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到

一次RNA甲基化测序的多项成果云序RNA甲基化测序技术...2

(二)云序客户m6A RNA甲基化修饰表达谱,一次测序两篇文章疾病:胃癌样品:胃癌组织vs癌旁组织(6 vs 6)研究方法:m6A-MeRIP-Seq,RNA-seq4. m6A修饰对其修饰基因在胃癌中的异常表达及预后的潜在影响发表杂志:Frontiers in Genetics影响因子:3.258

一次RNA甲基化测序的多项成果云序RNA甲基化测序技术...1

一次RNA甲基化测序的多项成果-云序RNA甲基化测序技术大公开文章导读RNA修饰是表观遗传学中调控转录后基因表达的关键过程,目前对m6A RNA修饰的研究已进行的如火如荼,而除了m6A以外仍有多种RNA修饰类型参与调控转录后的基因表达,其中包括m1A、m5C、m7G、2’-O-甲基化修饰以及ac

lncRNA启动子DNA甲基化/羟甲基化测序分析

技术优势:●   专注非编码RNA领域,完善的lncRNA启动子分析流程●   可与lncRNA表达谱芯片联合应用,实现平台间无缝对接●   可视化数据展示,提供paper级结果图表●   优化的IP实验方法,可信赖的检测平台及数据结果 介绍:      人类基因组中仅有约2%的DNA序列最

亚硫酸氢盐测序法检测DNA的甲基化

亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BS

关于甲基化的亚硫酸氢盐测序法介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,

亚硫酸氢盐测序法检测甲基化的介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,

罗氏甲基化捕获试剂创新甲基化研究方法

  自2004年美国批准Vidaza (azacitidine)可用于血液疾病( 如MDS)的治疗以来,通过改变致病基因的表观遗传学特征进行疾病治疗的方法,为人们带来了疾病的新治疗策略。然而,由于表观遗传检测方法的局限,要确定基因的碱基在何处以何种程度被甲基化一直以来困扰着研究者,从而难以确定基

最新DNA甲基化测序技术比较研究

  在不同疾病中,DNA甲基化具有不同的模式。DNA甲基化的具体模式通常与诸如疾病亚型、疾病预后以及药物反应等临床信息具有一一对应的联系。在多种癌症的治疗过程中,DNA甲基化生物标志物可以帮助临床医生选择恰当的治疗方式。  对于拥有成千上万个样本的大量病人来说,全基因组映射与DNA甲基化分析是非常合

ctDNA(羟)甲基化测序案例分享(二)

案例解析案例1:ctDNA甲基化可作为肝癌诊断和进程的分子标志物原文:Circulating tumour DNA methylation markers for diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma期刊:Nature Materia

​ctDNA(羟)甲基化测序案例分享(一)

新型肿瘤标志物筛选利器-----ctDNA(羟)甲基化测序cfDNA(Cell free DNA)是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中降解的DNA小片段,是一种新型的分子标记物。ctDNA(Circulating tumor DNA)特指来源于肿瘤细胞的cfDNA,是液体活检主流方向。最新

lncRNA启动子DNA甲基化/羟甲基化测序分析综述

  技术优势:   ● 专注非编码RNA领域,完善的lncRNA启动子分析流程   ● 可与lncRNA表达谱芯片联合应用,实现平台间无缝对接   ● 可视化数据展示,提供paper级结果图表   ● 优化的IP实验方法,可信赖的检测平台及数据结果   介绍:    人类基因组中仅有

两篇PNAS:蛋白纳米孔检测DNA甲基化

  两个独立的研究团队利用通道蛋白实现纳米孔测序,成功鉴别了5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶。这两篇文章发表在同一期的美国国家科学院院刊PNAS杂志上。   基因组所蕴含的编码信息,包括DNA序列和核苷酸修饰两个部分。其中,动态的DNA甲基化模式,是基因表达的重要调控者,与细胞分化、胚胎发育和癌症

DNA甲基化与癌症之NGS检测篇

  摘要  DNA甲基化是哺乳动物中研究最为深入的表观遗传修饰之一。正常细胞中,DNA 甲基化有效的调控基因表达水平。某些抑癌基因的失活是由于启动子区域的高甲基化,大量实验研究表明,在多种类型癌症中,DNA甲基化导致了大范围的基因沉默。除了启动子区域和DNA重复序列中的甲基化水平改变外,甲基化还与非

Genome-research:不同RNA-m5C甲基化修饰存在巨大差异

  近年来,RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域最前沿最热门的研究方向之一,不断有CNS的文章问世,m5C RNA修饰的分子机理研究越来越清晰,也不断有学者探寻如何更全面的获得贴近真实的m5C修饰的原貌。近期,来自德国的Frank Lyko和Mark Helm团队在GENOME RESEARCH(

甲基化的基因组直接测序法

  基因组直接测序法是过去一直沿用的DNA甲基化的研究方法,用Maxam—Gilbert化学裂解法对基因组DNA进行处理,并以连接介导的PCR来放大信号强度,然后进行序列分析。此法是基于5mC在标准的Maxam—Gilbert胞嘧啶化学裂解反应中不被裂解,故5mC可通过在测序胶上缺少对应于胞嘧啶降解

m5C-RNA甲基化测序介绍

m5C RNA甲基化简介通过分析近几年的国自然立项,可以发现RNA甲基化这两年的基金项目呈指数级增长的趋势:特别是从2015年的5项到2017年的25项,项目增长尤为显著。仅2018年1月的RNA甲基化文献就达到25篇,可以说RNA甲基化的发展已经到了井喷阶段,多篇文章荣登CNS级别期刊。RNA甲基

Genome-research:不同RNA-m5C甲基化修饰存在巨大差异

  导读   近年来,RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域最前沿最热门的研究方向之一,不断有CNS的文章问世,m5C RNA修饰的分子机理研究越来越清晰,也不断有学者探寻如何更全面的获得贴近真实的m5C修饰的原貌。近期,来自德国的Frank Lyko和Mark Helm团队在GENOME RES

甲基化测序能否突破肿瘤难关?WGBS、杂交捕获了解一下?

  DNA甲基化是哺乳动物中研究最为深入的表观遗传修饰之一。正常细胞中,DNA 甲基化有效的调控基因表达水平。某些抑癌基因的失活是由于启动子区域的高甲基化,大量实验研究表明,在多种类型癌症中,DNA甲基化导致了大范围的基因沉默。除了启动子区域和DNA重复序列中的甲基化水平改变外,甲基化还与非编码RN

DNA甲基化技术介绍

DNA 甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分,在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用,是目前新的研究热点之一。介绍DNA甲基化是最早被发现、也是研究最深入的表观遗传调控机制之一。广义上的DNA甲基化是指DNA序列上特定的碱基在DNA甲基转移酶(DN

不同RNA-m5C甲基化修饰存在巨大差异

导读近年来,RNA修饰的研究已成为当今生命科学领域最前沿最热门的研究方向之一,不断有CNS的文章问世,m5C RNA修饰的分子机理研究越来越清晰,也不断有学者探寻如何更全面的获得贴近真实的m5C修饰的原貌。近期,来自德国的Frank Lyko和Mark Helm团队在GENOME RESEA

甲基化测序要躲哪些坑?甲基化检测的局限性剖析

表观组学研究滞后于基因组学是可以理解的。一方面,在分析碱基修饰或染色体活性之前,我们需要知道基因组的确切序列,即得到基因组的参考序列,在这个基础之上基因组的表观调控研究才能得以进行;另一方面,造成表观组学研究发展相对缓慢的一个重要原因,是目前支撑表观组学研究的技术手段都或多或少存在一定的局限性,限制

亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化——DNA甲基化

亚硫酸氢盐修饰后测序法主要可用来检测甲基化。基化实验方法原理重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,用PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较

HRM甲基化位点检测的灵敏性(一)

引言DNA甲基化是一种重要的表观遗传CpG二核苷酸修饰形式,异常的DNA甲基化模式发生在许多基因启动子的CpG岛,这会增加患癌症的风险。CpG岛高甲基化常导致基因沉默,与癌症、老化、基因印记、X-染色体失活密切相关,此外,全基因组CpG高甲基化中也证实了发生在肿瘤形成的早期。传统的检测甲基化位点的方

焦磷酸测序在甲基化分析中的应用

  DNA甲基化是近年来研究的热点,因为越来越多的证据表明,它参与了胚胎发育、基因印迹等过程。同时,它在疾病发展中也起着举足轻重的作用。甲基化状态的改变被认为是引起癌症的一个重要因素,这种变化包括基因组整体甲基化水平的降低和CpG岛局部甲基化水平的异常升高,从而导致基因组的不稳定(如染色体的不稳定、

单分子测序助力细菌甲基化组的分析

  New England Biolabs联合Pacific Biosciences的研究人员利用PacBio RS系统对6种细菌基因组进行了重测序,不仅鉴定出细菌基因组中新的胞嘧啶和腺嘌呤甲基化位点,还鉴定出介导这些表观遗传学标志的甲基转移酶。该研究成果近日发表在《Nucleic Acid

蛋白质DNA相互作用的甲基化和尿嘧啶干扰分析法—甲基化

实验方法原理在甲基化干扰实验中,探针通过将鸟嘌呤N-7及腺嘌呤N-3位用硫酸二甲酯 (DMS)进行甲基化而产生。这些甲基化的碱基可被哌啶特异性切割。实验材料含有蛋白质结合位点的DNA片段试剂、试剂盒TE 缓冲液 pH 7.5 〜8.0硫酸二甲酯(DMS)DMS反应缓冲液DMS终止缓冲液10 mg m