福尔马林:保存标本帮助DNA和RNA的提取

在历史上人们使用了各种固定液(各种浓度的乙醇和福尔马林,目前公认的固定液是10%的中性福尔马林溶液)。马尔福林基本的固定能力是通过蛋白质交联,从而使固定物质更加牢固。福尔马林还可以作为适合基因组研究的培养基,比如DNA和RNA的提取研究。 DNA和RNA的恢复,对于许多科学领域和医学专业都非常重要。尽管常常不采取化学固定保存回收的标本,但美国印第安纳大学医学院Shannon Cook等学者这项研究仍可以作为年代久远、未做防腐的标本核基因组材料回收的基本准则。学者大致研究了从1920年至2000年的标本,评估了这些样本中肾脏、肝脏、心脏、肺、脾、子宫和大脑等各种器官的标本。文章发表在科研出版社英文期刊《Forensic Medicine and Anatomy Research》(法医学与解剖学研究)上。 大体上,所有器官都看起来完好,在组织内仍可看到病变状况(出血、坏死、炎症和肿瘤)。先前对FFPE组织的DNA提取结果也......阅读全文

组织和细胞的固定方法

 组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态,防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度,使其更容易切片,使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类,物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波

组织和细胞的固定方法

组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态,防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度,使其更容易切片,使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类,物理固定可采用空气干燥(血涂片)、骤冷(在液氮中迅速冷冻)或微波固

组织固定

一、固定的目的和意义活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学改变,并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐 败自溶。固定的目的就是要通过使用化学和物理的方法,尽可能地保存组织细胞离体时具有的生理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。良好

组织固定固定液的选择

影响标本固定的因素很多,如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所选固定液不当,细胞内蛋白质、脂类、核 酸等成 分将会有不同程度地损失。固定剂最好随配随用,并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的,选用合适的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方

组织固定的注意事项

1.及时取材:由于甲醛对组织的平均穿透速度只有0.8 mm/h,因此手术切除的送检标本应及时切开进行取材,以便保证重要的镜检部位能及时地得到固定。 2.及时固定:完成取材的组织块应立即投入固定液以便尽可能地保存组织细胞的形态结构和抗原性。 3.液量充分:一般情况下要求

组织和胚胎固定及包埋实验

实验材料器官试剂、试剂盒多聚甲醛石蜡已传二甲苯仪器、耗材玻璃瓶培养箱巴斯德吸管包埋提环包埋模具实验步骤1.  将已解剖的器官或胚胎置于写有标签的20 ml 螺口玻璃小瓶中(经硅烷化处理的玻璃瓶专用于小量样品的处理),如入4℃新鲜配制的4%PFA,置4℃固定至所需时间止。 2.  于60℃烘箱中熔化石

组织和胚胎固定及包埋实验

实验材料 器官试剂、试剂盒 多聚甲醛石蜡已传二甲苯仪器、耗材 玻璃瓶培养箱巴斯德吸管包埋提环包埋模具实验步骤   将已解剖的器官或胚胎置于写有标签的20 ml 螺口玻璃小瓶中(经硅烷化处理的玻璃瓶专用于小量样品的处理),如入4℃新鲜配制的4%PFA,置4℃固定至所需时间止。2.  于60℃烘箱中熔化

细胞常用固定剂和固定方法

培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟,干燥。2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟,自然干燥。3.丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细

冰冻组织固定和蔗糖浸制实验

实验方法原理 实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 PBSPFA蔗糖实验步骤 1. 于4℃,在2%PFA固定液(做免疫组织化学时)或4%PFA固定液(做原位杂交时) 中,固定小的组织样品或分离的胚胎(如第7、第8天的小鼠胚胎)30 min。2. 在PBS中清洗组织样品2次。3. 在30%蔗糖中浸制样品,直

冰冻组织固定和蔗糖浸制实验

实验材料冰冻组织试剂、试剂盒PBSPFA蔗糖实验步骤1. 于4℃,在2%PFA固定液(做免疫组织化学时)或4%PFA固定液(做原位杂交时) 中,固定小的组织样品或分离的胚胎(如第7、第8天的小鼠胚胎)30 min。2. 在PBS中清洗组织样品2次。3. 在30%蔗糖中浸制样品,直至组织沉下(1~3

组织固定、包埋及切片实操指南

  如何做出一张合格的组织切片?  一般要先取材→固定→透明→包埋→切片,最后进行染色组化等操作。本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。  包埋可分为OCT包埋(冰冻切片)与石蜡包埋。  冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好,但是形态保留比较差,一般用来做原位杂交ISH,免疫荧光IF。冰冻切片较厚一

固定化细胞概述

  固定化细胞是指固定在水不溶性载体上,在一定的空间范围进行生命活动(生长、发育、繁殖、遗传和新陈代谢等)的细胞。  固定化细胞技术是用于获得细胞的酶和代谢产物的一种方法,起源于20世纪70年代,是在固定化酶的基础上发展起来的新技术。由于固定化细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢,所以又称固定化活细

怎样固定悬浮细胞

如何判断悬浮细胞培培养时,细胞是死的还是活的将在动物细胞凋亡研究中应用的Hoechst-PI双重荧光染色 法与琥珀酸脱氢酶(SDH)染色法相结合,建立了一种更加完善的、能同时鉴别和研究悬浮培养的植物细胞凋亡及坏死的新方法——Hoechst-PI- SDH三重染色法(H-P-S法)。该方法可直接用于红

几种细胞固定方法

选择最佳固定液标准是: (1)最好地保持细胞和组织的形态结构; (2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的; (3)不要用可能带有自发荧光的固定剂,如带有苦味酸的固定剂,还有甲醛升汞固定液,会使上皮细胞产生非特异性荧光; (4)固定剂的选择、固定时间、

电镜组织样品固定液的选择及其配制

  自1931世界上第一台电子显微镜诞生以来,微观世界的大门开放的更加广阔。目前电镜被广泛运用于各器官系统疾病的病理诊断中,除了运用在肿瘤的诊断与鉴别诊断中,用得最多的是肾脏活检和某些皮肤疾病的诊断,其中透射电子显微镜是最早,最广泛应用于医学领域的一种电镜。随着电镜在医学上的应用,人类通过观察细胞膜

固定化细胞的分类

无载体的固定无载体固定主要目的是将吸附或者共价交联的细胞,彼此分成自身独立的区域。所谓吸附过程是指细胞发酵过程中产生的细胞体絮凝或者呈丸粒状;或通过二级过程,在适应的参数变化之下,简单有效地制各出具有触媒活性的颗粒。在此过程中。往往加入少量絮凝剂(即聚合物),加入的聚合物可直接参与细胞间的相互作用。

细胞的PFA固定实验

实验材料细胞悬液                                                          试剂、试剂盒PFA                                                                  PBS      

固定化细胞的方法

细胞的种类多种多样,大小和特性个不相同,故此细胞固定化的方法有很多种。归结起来,主要可以分为吸附法和包埋法两大类。吸附法利用各种吸附剂,将细胞吸附在其表面而使细胞固定的方法称为吸附法。用于细胞固定化的吸附剂主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金属丝网、微载体、和中空纤维等。酵母细胞带有负电荷

固定化细胞技术简介

所谓固定化细胞技术,就是将具有一定生理功能的生物细胞,例如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等,用一定的方法将其固定,作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。

LSCM细胞固定和染色

细胞固定和染色除了上述使用多聚甲醛固定细胞的方法外,还有一种普遍使用的方法是:培养细胞在 - 20 °C 预冷的甲醇中孵育 5 min。但这种方法对于固定表达荧光蛋白的细胞及 FRET 实验中并不推荐。这是因为:这种处理方法是沉淀细胞内的蛋白,而不是使蛋白质发生交联。此外,为了尽可能减少抗体的用量,

细胞的PFA固定实验

实验材料 细胞悬液试剂、试剂盒 PFAPBS仪器、耗材 载玻片加湿盒玻璃染色盘实验步骤 1.  吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。 2.  将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定

细胞的PFA固定实验

悬浮法             实验材料 细胞悬液 试剂、试剂盒

什么是固定巨噬细胞?

大部分的巨噬细胞会聚集在一些易于被微生物入侵或囤积尘埃的组织器官中。每一种固定巨噬细胞都会因所在部位的不同而得到不同的特定名称。库佛氏细胞的研究受到限制,因为只有来自活检或尸检的人类库佛氏细胞可以用于免疫组织化学分析。而要在老鼠中把之分离是非常困难的,而且在提纯以后,亦只能从一只鼠身上获得大约五百万

固定化细胞的固定化原理及方法简介

  细胞的种类多种多样,大小和特性个不相同,故此细胞固定化的方法有很多种。归结起来,主要可以分为吸附法和包埋法两大类。  吸附法  利用各种吸附剂,将细胞吸附在其表面而使细胞固定的方法称为吸附法。  用于细胞固定化的吸附剂主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金属丝网、微载体、和中空纤维等。 

组织细胞是什么-组织细胞介绍

  1、组织细胞(histiocyte)又称吞噬细胞(phagocyte)。来自血液中的单核细胞,可见于痰液、浆膜腔积液及宫颈涂片等标本中。  2、具有吞噬功能,细胞大小很不一致,一般略大于中性粒细胞。形态为圆形、卵圆形或各种不规则形。核呈圆形、卵圆形、长形或肾形,直径5~7μm。核内染色质颗粒少而

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水消化缓冲液(lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

            实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒甲酰胺

原位杂交中植物组织要用faa固定多久

石蜡切片法——固定与包埋 一、实验目的 掌握石蜡切片法中固定、透明与包埋的基本操作步骤及要点。 二、实验材料 党参、秦艽或其它药材的根 三、实验用具及试剂 福尔马林-酒精-醋酸混合固定液(简称FAA)、各级酒精溶液

细胞固定切片和包埋实验

哺乳动物肌梭的初级终末—使 用 1 um 连续切片的光学显微镜研究实验             实验材料 猫 部分显露肌梭