金属汞及其化合物主要以蒸汽或粉尘形态经呼吸道进入人体; 因可溶于类脂质, 如与皮肤直接接触时也可经完整皮肤进入体内。汞中毒表现有神经精神症状、口腔炎症表现、汞毒性皮炎、心功能损伤、肾功能损伤等临床表现。目前生物样本中汞的测定方法主要包括原子吸收光谱法(atomic absorption spectroscopy, AAS)、原子荧光光谱法(atomic fluorescence spectroscopy, AFS)、电感耦合等离子体-原子发射光谱法(inductively coupled plasma-atomic emission spectroscopy, ICP-AES)和电感耦合等离子体质谱法(inductively coupled plasma-mass spectrometry, ICP-MS)。其中AAS检测汞元素操作方便, 成本低, 稳定性好, 是目前临床上常用的检测方法。但是该方法单批次只能检测单一样本形式(液体类、固体类)中的单一的汞元素, 而且单个样本检测时间长, 不能批量上机检测, 从而不能有效节约检测时间。ICP-MS检测具备灵敏度高、线性范围广和多元素同时检测的特点。我们采用盐酸作为基体, 研究ICP-MS检测人全血汞元素的可行性。
材料和方法
一、相关工作液的配制
1.试剂来源
盐酸[分析纯(analytical reagent, AR)]购自江苏强盛功能化学股份有限公司; 硝酸(AR)、双氧水(AR)购自德国默克公司; 超纯水(18.2 MΩ )用美国密理博(Millipore)超纯水仪制备; 调谐液(锂、钇、铈、铊、钴, 10 ng/mL, 批号3-733BD)购自安捷伦公司; ICP-MS汞标准溶液(1 mg/mL, 批号212075014)、ICP-MS铼标准溶液(1 mg/mL, 批号211095099)购自美国AccuStandard公司; 全血汞质控品购自美国Kaulson Laboratories公司(批号HMB293R11& HMB894R0)。
2.调谐液
10 ng/mL调谐液用2%硝酸配制成1 ng/mL调谐工作溶液, 置4 ℃保存备用。
3.内标液
1 mg/mL 铼标准溶液用2%硝酸配制成1 μ g/mL内标工作溶液, 置4 ℃保存备用。
4.汞标准液
1 mg/mL汞标准溶液用2%盐酸配制成0.1、0.5、1.0、2.5、5.0和10.0 ng/mL标准液, 置聚酯瓶中, 4 ℃备用。标准溶液最多使用1周, 及时更换。标准曲线每天绘制。
二、仪器主要参数设置
AGILENT 7500CE型ICP-MS仪(美国安捷伦科技有限公司)。主要工作参数设置:射频功率(radio-frequency power, RF)为1 500 W; 采样深度为8.5 mm; 载气流为0.7 L/min; 补偿气体流量为0.2 L/min; 蠕动泵转速为0.1 r/s; 雾化器温度为2 ℃。MARS5型微波消解仪(美国CEM公司)主要工作参数见表1。
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三、全血消解(全血前处理)
消解罐放入50%硝酸浸泡过夜, 取出消解罐, 用去离子水清洗3次, 倒扣, 放入烘箱中烘干。取100 μ L去离子水, 混合均匀的全血汞质控品及待测全血分别置于烘干的消解罐中, 每个消解罐分别继续加入200 μ L硝酸、200 μ L双氧水和20 μ L盐酸。盖上消解盖, 按次序放入消解盘中按微波消解仪设置好的程序进行消解。消解完成后待消解罐冷却, 加入2%盐酸溶液2 mL稀释待测。
四、定标过程
仪器使用前用调谐液优化仪器工作参数, 使仪器的氧化物干扰< 1.5%, 双电荷干扰< 3%。标准液按以下次序进样:空白(2%盐酸)、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 ng/mL。同时内标液通过三通阀与进样管混匀进入仪器检测。
取2 mL稀释待测样本溶液置于样本杯中, 在优化仪器状态下检测样本。每9个样本加1个2%盐酸空白, 冲洗管道。
五、方法学评价
1.检测下限的确定
样本的处理过程同全血消解过程。检测11份空白样本, 计算出检测低限(lower limit of detection, LLD), 公式:LLD=