四大酵母培养基的配置原理和方法

实验概要

了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。

实验原理

麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 

主要试剂

1. 葡萄糖

2. 蔗糖

3. NaN0₃

4. K₂HP0₄

5. KCl

6. MgSO₄·7H₂O

7. FeS0₄

8. 琼脂 

9. 新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等

主要设备

1. 仪器：天平、高压蒸汽灭菌锅。

2. 玻璃器皿：移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。

实验步骤

1. 麦芽汁培养基的配制 

   1) 培养基成分  
新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 

   2) 配制方法   

      a. 用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。   
      b. 取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。   
      c. 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 ml，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。   
      d. 用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6.4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。   
      e. 如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。   
      f. 分装、加塞、包扎。   
     g. 高压蒸汽灭菌  100 Pa灭菌20 min。 

2. 马铃薯葡萄糖培养基的配制

   1) 培养基成分  
　　马铃薯　　　20g  
　　葡萄糖　　　2 g  
　　琼脂　　　　1.5-2g  
　　水　　　　　100ml  
　　自然pH

   2) 配制方法
      a. 配制20％马铃薯浸汁  取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml。80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。   
      b. 配制时，按每100 ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。   
      c. 分装、加塞、包扎。   
      d. 高压蒸汽灭菌  100 Pa灭菌20 min。

3. 豆芽汁葡萄糟培养基的配制  

   1) 培养基成分   
　　黄豆芽　　　10g  
　　葡萄糖　　　5g  
　　琼脂　　　　1.5-2g  
　　水　　　　　100ml  
　　自然pH 

   2) 配制方法
      a. 称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 ml水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。  
      b. 配制时，按每100 ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，继续加热融化，补足失水。   
      c. 分装、加塞、包扎。   
      d. 高压蒸汽灭菌  100 Pa灭菌20 min。

4. 察氏(czapck)培养基的配制

   1) 培养基成分  
　　蔗糖　　　　　　　3g  
　　NaN0₃　　　　　0.3g  
　　K2HP0₄  　　　　0.1g  
　　KCl 　　　　　　 0.05g  
　　MgSO₄·7H₂O    　0.05 g  
　　FeS0₄ 　　　　　0.001 g  
　　琼脂　　　　　　1.5-2g  
　　蒸馏水　　　　　100ml  
　　自然pH    
    2) 配制方法
      a. 称量及溶化  量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO₃ 、K₂HP0₄ 、KCl、MgSO₄。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1％的FeS0₄溶液。  
      b. 定容  候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。  
      c. 加琼脂  加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。  
      d. 分装、加塞、包扎。  
      e. 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。