应用固相萃取（二）

3.3 样品的前处理

3.3.1 提取剂的选择

饲料组成极为复杂，对磺胺类药物的提取和测定干扰较大。在本研究中，考察了甲醇、70%酸性甲醇、乙睛和95%乙睛水四种提取剂的提取效果及对测定的影响。结果如图所示。

由图可知以甲醇和70％的酸性甲醇为提取剂时，色谱图基线不平，可能影响样品的测定。而95%乙

睛水对碱性氧化铝小柱具有穿透作用，使得目标分析物流失。因此，选择乙睛作为提取剂。

3.3.2 碱性氧化铝小柱饱和容量

考察了氧化铝小柱的最大饱和容量，将标准溶液10μg/mL分别上柱2 mL、5 mL、10 mL、20 mL、30  mL，结果如表3所示。由表中结果可知，碱性氧化铝小柱对磺胺类药物的承载量小于200μg。而磺胺类药物在配合料中的添加量约为100～200mg/kg，在添加剂预混合饲料中大于1000mg/kg，在称样量为2g时，配合饲料上样量定为10mL；添加剂预混合饲料上样量定为2mL。

表3 碱性氧化铝SPE小柱穿透性结果—下滴液中SAs百分率

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3.3.3 洗脱剂的选择

考察了75%乙睛水、25%乙睛水和纯水三种洗脱液，每次用2mL洗脱液，洗脱3次，结果见表4。由表中结果可知，75%的乙睛水洗三次后仍有个别磺胺类药物未被洗脱；而25%乙睛水、纯水在三次洗脱后，洗脱液中已无任何磺胺类药物。由于25%的乙睛水恰恰是流动相的组成，因此确定用25%的乙睛水2mL洗脱两次

表4 洗脱剂的选择—不同洗脱剂分次洗脱百分率（%）（100ng标准溶液）

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3.4 样品的测定

将该方法用于鸡配合饲料和猪配合饲料中磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉等五种磺胺类药物的测定。考察了20μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL浓度水平加标回收，回收率结果见表5。在鸡配合饲料中，四个浓度水平的磺胺类药物的回收率高于77.7%，RSD≤；在猪配合饲料中，四个浓度水平的磺胺类药物的回收率高于80.2%，RSD≤；由于在猪浓缩饲料中磺胺类药物添加量较高，因此只考察了一个浓度水平的回收率，结果见表6。

表5（1） 鸡配合饲料中五种磺胺类药物的回收率

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表5（2） 猪配合饲料中五种磺胺类药物的回收率

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表6 猪浓缩饲料中磺胺类药物的回收率

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4 结论

高效液相色谱法测定饲料中磺胺类药物，方法简单、易于操作，准确度、精密度均符合要求。该方法适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺类药物的检验。

5参考文献

1  GB/T19542-2004“饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定 高效液相色谱法”；

2  NY5029-2001 无公害食品 猪肉 附录E 磺胺类药物在动物可食性组织中的高效液相色谱检验；

3  Kristof E.Maudens, Quantitative  analysis of twelve sulfonamides in honey after acidic hydrolysis by  high-performance liquid chromatography with post-column derivatization  and fluorescence detection. Journal of Chromatography A,1047(2004) 85-92

4 John D. Weber, liquid chromatography determination of sulfamethazine in milk ,J.ASSOC.OFF.ANAL.CHEM(VOL.72,NO.3,1989)

5 Joe O.Boison  ,Determination of Sulfadimethoxine and Sulfamethazine Residues in animal  tissues by liquid chromatography and thermospray Mass spectrometry ,  Journal of AOAC, VOL 78,NO.3, 1995