中国对虾(Penaeuschinensis)酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质

摘要　　以中国对虾( Penaeus chinensis) 的血淋巴为材料, 利用凝胶过滤和离子交换等方法, 对酚氧化酶(phe2noloxidase , E. C. 1. 10. 3. 1) 进行了分离纯化和生物化学性质研究。实验发现, 酚氧化酶原(prophenoloxidase) 的分子量为87. 5 kD 左右, 在实验操作过程中极易发生降解或自身降解, 变成有活性的大小约77 kD 的酚氧化酶, 10g/ L SDS 可使该酶原全部被激活而成为有活性的酚氧化酶。以L2二羟苯丙氨酸( L2DOPA) 为特异性底物对酚氧化酶活性进行研究发现, 其最适pH 值为6. 0 左右, 最适温度为40 ℃, Km 值约为1. 99 mmol/ L 。利用多种氧化酶抑制剂对酚氧化酶纯化样品的酶活性进行研究, 发现抗坏血酸(ascorbic acid) 、半胱氨酸(cysteine) 和二硫苏糖(dithiothreitol) 对酚氧化酶活性具有很强的抑制作用, 硫脲(thio urea) 对酚氧化酶活性也具有较强的抑制作用, 而酚氧化酶对苯甲酸(benzoic acid) 、柠檬酸(citric acid) 和亚硫酸钠(sodium sulfite) 不敏感, 而且该酶对酪氨酸等单酚还具有高特异性的酚氧化酶活性, 表明它可能是一种酪氨酸酶型的酚氧化酶; 此外, 该酶对EDTA 和金属离子非常敏感, 其活性能被Cu2 + 强烈抑制, 被Mg2 + 强烈激活, 表明该酶很可能是一种金属酶(metalloenzyme) 。