中和试验的检查过程和注意事项

中和试验的检查过程和注意事项

(一)简单定性中和试验
本法主要用于检出病料中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒先根据病毒易感性选定试验动物(或鸡胚、细胞培养)及接种途径。将病料研磨，并稀释成一定浓度(约100 LD50-1 000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青霉素、链霉素各200-1 000单位)，或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清(适当稀释或不稀释)等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。混合后置37℃1h，分别接种实验动物，每组至少3只。分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。本法亦可用于毒素(如毒毒素)的鉴定和分型。
(二)固定血清稀释病毒法
本法多将病毒作10倍递增稀释，分置2列试管，*列加正常血清(对照组)，第二列加待检血清(试验组)。混合后，置37℃作用1h，将各管混合液分别接种选定的试验动物，每一稀释度用3-5只动物。接种后，逐日观察，并记录其死亡数，观察结束后，计算LD50和中和指数，本法适用于大量检样的检测。
本法多用以检出待检血清中的中和抗体，对病毒而言，通常中和指数大于50者判为阳性，10-49为可疑，小于10为阴性。
(三)固定病毒稀释血清法
本法用以测定抗病毒血清的中和价，将待检血清2倍递增稀释，加等量已知毒价的病毒液(与血清混合后，每一接种剂量含病毒100LD50)，摇匀后，置37℃作用1h，接种实验动物。
注：[1] 接种剂量0.1ml，含病毒100LD50;
[2] 系指与病毒混合后的稀释度;
[3] 分母为接种数，分子为保护数;
[4] PD50为半数保护，其计算法同LD50的计算。
(四)空斑减少法
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每0.2ml含80个-100个PFU(空斑形成单位)，与不同稀释度的待检血清等量混合，置37℃作用1h-2h，分别测定PFU，使空斑减少50%血清稀释度即为该血清的中和价。见表7-4。
表7-4 空斑减少法中和试验示例
注：[1] 血清用4倍递增稀释;
[2] 空斑减少50%的血清稀释度，其计算法同LD50的计算。

牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒注意事项
不合宜人群： 没有。
检查前禁忌：注意正常的生活饮食习惯，注意个人卫生。
检查时要求：积极配合医生。