什么酶呢?最后酶切组的电泳条带是弥散,是只有质粒条带没有酶切产物条带,还是干脆就是空白?
如果是弥散,最有可能的是所用的酶的反应条件要求比较严格,因为掌握不当而产生了星号活性,导致把质粒切碎了。建议查一下所用酶的酶切条件。
如果是有质粒条带而没有短片段条带,也就是说没切开了。可能酶切位点发生了突变,也可能是酶失活了。
如果是空白...我也不知道怎么回事儿了...再重复一次吧。
如果认为之前的步骤都没什么问题,不如直接送测序。比酶切检验还要精确呢。
摘要采用微波谐振腔对细胞色素c以及牛血清白蛋白进行微波辅助酶解,通过电喷雾三级四极杆质谱对得到的肽段进行分析,证明该方法可用很低的微波功率将蛋白质彻底酶解为多肽.通过调整微波条件可以使蛋白质的酶解效率......
以凝血酶适体(aptamer)为例,利用适体和核酸外切酶特性,通过定量PCR扩增建立一种高灵敏的蛋白质检测方法.首先合成3段寡核苷酸序列即凝血酶适体探针,上游连接子和下游连接子.将适体探针与凝血酶温育......
本方法适用于序列已知的蛋白质的突变点确证不包括Leu-Ile之间的突变和Lys-Gln之间的突变。......
本方法适用于重组人肿瘤坏死因子衍生物3a突变区的氨基酸序列分析,采用蛋白质工程技术使天然肿瘤坏死因子(TNF)分子发生突变以期能获得高活性低毒的衍生物便于临床推广使用。......
酶切反应系统包括:DNA,酶,buffer,灭菌水。不同公司的酶和buffer系统是不同的,所以一个反应应该用同一个公司的酶和buffer(常识)。NEB和promega的酶都不错的,我们常用的酶是N......