乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法

三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造 纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与 乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测 液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、 重现性以及回收率均符合国家标准。

1   实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（含UV1620紫外-可见检测器1台，P1620高压恒流泵1台；AT-330色谱柱温箱；FA2004分析天平；TGL-16G-A离心机；三聚氰胺标准品>99%；辛烷磺酸钠(色谱纯)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯)、纯净水。

1.2 标准品溶液配制

精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。

1.3 样品前处理

称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul，加 入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。

1.4 色谱条件：

色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)

流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）

流速：1.0ml/min

波长：240nm

温度：40℃

进样量：20μl

2   实验结果

2.1 精密度实验

取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。

表1 精密度实验

图1 三聚氰胺标准品

2.2   标准曲线

配置浓度分别为0.142、0.284、0.853、1.422、7.110、14.220μg/mL的三聚氰胺标准工作液。将以上6种标准工 作液在上述色谱条件下按浓度由低至高进样。用最小二乘法以对照品浓度(横坐标X轴，µg/ ml)对峰面积(纵坐标Y轴)进行线性回归，求算标准曲线。

2.3   加样回收率和重现性实验

取已知三聚氰胺含量的酸奶样品，加入一定量的标准储备液，按“样品前处理” 操作，平行制备3份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到加样回收率及重现性结果，见表2。

表2 加样回收率和重现性（n=3）

图2 空白酸奶样品

图3 加标酸奶样品

2.4   检测限及定量限

依据噪声值，按3倍信噪比，计算其理论检出限，为0.221 mg/kg；按10倍信噪比，计算其定量限，为0.738 mg/kg。

3         结论

本方法优化了高效液相色谱法检测乳制品中三聚氰胺测定方法，该方法简化了前处理步骤，易于操作，线性关系良好，有较好的精密度和重现性，回收率满足国家标准的要求，检出限和定量限也符合目前三聚氰胺的检测要求。