人用疫苗杂质控制

　　新版中国药典发布3309人用疫苗杂质控制技术指导原则，以20版药典三部《人用疫苗总论》为基础，基于我国已上市疫苗产品的杂质控制的实际经验，参考ICH关于风险评估和全生命周期管理理念，从疫苗杂质来源，疫苗杂质控制的原则及策略，包括风险评估、全过程控制、全生命周期管理、不同类型疫苗杂质的控制要点，以及变更事项对疫苗杂质控制等各方面保证疫苗产品质量。赛默飞色谱与质谱针对传统疫苗、重组疫苗和核酸疫苗提供全方位的研发及工艺质控。

　　工艺相关杂质

　　工艺相关杂质主要来源于生产用物料，包括生产过程中使用的起始物料，生产过程中引入的原材料，制剂所用辅料以及直接接触药品的内包装材料的浸出物等。

　　1. 宿主细胞蛋白残留物

　　随着高分辨质谱技术性能的不断提升，已具有高灵敏度和宽的定量动态范围，以及蛋白质组学技术的飞速发展，可实现对未知蛋白质的高通量定性和定量。

　　采用赛默飞EASY nLC 1200与Orbitrap系列高分辨质谱仪联用，UPS2中含有48种内标蛋白6个不同浓度，共鉴定其中24种，其实际含量结果如下表，含量范围为0.05-444.88ppm，实际含量>1ng（10ppm）的16种内标蛋白全部鉴定到，实际含量在0.06-0.38ng（0.6-3.8ppm）范围内共鉴定到6种，此方案的灵敏度足以满足生物药领域客户的需求。

本次实验中鉴定到UPS2内标蛋白的种类及其实际含量

　　2. 疫苗工艺及质量控制解决方案

　　裂解剂

　　在疫苗制备过程中加入裂解剂，如乙醚、聚山梨酸酯80、脱氧胆酸钠等，以裂解病毒粒子，再经纯化工艺去除部分病毒成分，以有效降低不良反应，如甲型肝炎灭活疫苗（人二倍体细胞）生产流程中提纯工艺阶段需用去氧胆酸钠进行细胞裂解，疫苗中残留去氧胆酸的含量不得高于20μg/mL。

　　新版美国药典收录CAD检测器作为去氧胆酸残留和有关物质的方法。CAD检测器结合Acclaim Surfactant色谱柱，可同时对胆酸、去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和牛黄脱氧胆酸进行检测，获得高分离度、高灵敏度和重现性的结果。

　　培养基

　　牛血清白蛋白用于细胞培养，但它也是一种异种蛋白，残留量偏高的情况下，多次使用能引发机体的过敏反应。药典规定测定病毒类疫苗中残余牛血清白蛋白的含量，应不超过50ng/剂。

　　采用MabPac SEC体积排阻色谱柱结合生物惰性液相Vanquish对牛血清白蛋进行了直接测定，无需衍生，能有效排除小分子的干扰，可以排除无/弱紫外吸收大分子辅料干扰（如吐温、PEG等），适用于高盐和宽pH范围缓冲液，有效防止蛋白吸附。

　　佐剂检测

　　铝佐剂是最早使用的佐剂，也是目前唯一广泛使用的疫苗佐剂，铝佐剂具有便宜、安全、合成简单的优点，但也存在易在体内蓄积、可能刺激I gE 产生、无法生物降解等问题。在疫苗成品中需对铝含量进行检测，如13 价肺炎球菌结合疫苗中铝含量应为 0.15-0.35 mg/ml，吸附白喉疫苗中氢氧化铝不得高于0.3mg/ml。

　　对于佐剂中Al含量进行检测，AA、ICPOES和ICP-MS方法均具有极高的灵敏度，iCE3000系列AA优异的光学系统结构、高精度控温和背景扣除技术，可将Al元素在石墨炉分析中的发射干扰有效去除；而iCAP Qnova系列ICP-MS专利技术的Q Cell碰撞池结合低质量数剔除技术，能够将Al元素在质谱分析中的多原子干扰做到完全去除，这些技术的使用确保了佐剂中Al检测获得最佳的准确性和稳定性等方法学数据要求。

iCE 3000 系列原子吸收分析Al 标准曲线及吸收峰