人红细胞膜衰变加速因子的分离纯化及其生物学活性鉴定

[摘　要] 　目的　获得纯化并具有生物学活性的人红细胞膜衰变加速因子。方法　经胰蛋白酶消化、正丁醇抽提及DE32和Sepharose 6B 色谱分离等步骤从人红细胞膜影中分离纯化人红细胞膜衰变加速因子(DAF) 。以SDS2PAGE 及免疫印迹实验检测纯度及抗原特异性,以C3 转化酶体外组装实验及促衰变活性实验检测其补体抑制活性。结果　400 mL 人全血最终可得纯化DAF 约370μg ,回收率达10. 4 %;比活性为每毫克2. 24 ×105 units ;纯化产物在SDS2PAGE 表现为70 000 u 的单一蛋白条带,在免疫印迹实验中可与抗人DAF 单抗特异性结合。在生物学活性实验中,纯化产物既可促进C3 转化酶衰变,也可抑制C3 转化酶形成。结论　采用本方法可获得纯化的具有生物学活性的人衰变加速因子。