人红细胞膜衰变加速因子的分离纯化及其生物学活性鉴定
[摘 要] 目的 获得纯化并具有生物学活性的人红细胞膜衰变加速因子。方法 经胰蛋白酶消化、正丁醇抽提及DE32和Sepharose 6B 色谱分离等步骤从人红细胞膜影中分离纯化人红细胞膜衰变加速因子(DAF) 。以SDS2PAGE 及免疫印迹实验检测纯度及抗原特异性,以C3 转化酶体外组装实验及促衰变活性实验检测其补体抑制活性。结果 400 mL 人全血最终可得纯化DAF 约370μg ,回收率达10. 4 %;比活性为每毫克2. 24 ×105 units ;纯化产物在SDS2PAGE 表现为70 000 u 的单一蛋白条带,在免疫印迹实验中可与抗人DAF 单抗特异性结合。在生物学活性实验中,纯化产物既可促进C3 转化酶衰变,也可抑制C3 转化酶形成。结论 采用本方法可获得纯化的具有生物学活性的人衰变加速因子。点击这里进入下载页面：进入下载页面......阅读全文
衰变加速因子的基本介绍
促衰变因子（decayacceleratingfactor,DAF）是Nicholson-Weller等（1981）用正丁醇提取后，再以层析法从人和豚鼠红细胞基质中纯化的一种膜蛋白。因其具有促进C3转化酶衷变的活性故名。经在还原条件下做SDS-PAGE并以过碘酸-Schiff试剂染色表明，纯化的
关于衰变加速因子的功能介绍
DAF生物学活性及生理功能已虱到充分证实。它可保护宿主细胞免遭补体介导的溶解破坏。其作用机理是，DAF不仅可阻止经典或替代途径C3和C5转化酶的装配，并且可通过诱导催化单位C2a或Bb的快速解离而使已形成的C4、C5转化酶失去稳定性，从而抑制补体攻击单位的活化。DAF的这种抑制作用仅限于直接结合
关于衰变加速因子的广泛应用
除Nicholson-Weller等证实的分子量为70kDa的膜DAF外，Kinoshita等（1987）用Westernblotting在人红细胞表面还检出分子量为140kDa的一种膜DAF，称其为DAF-2。DAF-2在膜上的数目不足70kDa膜DAF的1/10，但也有促进C3b转化酶衰变的
H因子的功能
H因子的功能包括以下几个方面：（1）为Ⅰ因子的辅助因子，可增加C4b对Ⅰ因子的敏感性。在无H因子时，Ⅰ因子与C3b的结合呈丝状；而在有H因子存在时，I因子与C3b的结合变为弯丝状，同时与C3b的结合亲和力增强（较无H因子时至少高15倍）。H因子强化I因子的机理，可能是H因子与C3b结合后，使C3
关于H因子的功能介绍
（1）为Ⅰ因子的辅助因子，可增加C4b对Ⅰ因子的敏感性。在无H因子时，Ⅰ因子与C3b的结合呈丝状；而在有H因子存在时，I因子与C3b的结合变为弯丝状，同时与C3b的结合亲和力增强（较无H因子时至少高15倍）。H因子强化I因子的机理，可能是H因子与C3b结合后，使C3b出现某些构象变化，增加了与I
免疫学知识提纲（三）
第四章 补体系统补体系统： 存在于人和脊椎动物新鲜血清与组织液中一组不耐热的、经活化后具有酶活性的蛋白质。 可参与机体的特异性与非特异性免疫应答的效应阶段, 表现为抗微生物防御反应、免疫调节及介导免疫病理的损伤性反应, 是体内具有重要生物学作用的效应系统和效应放大系统。 一。 补体系统的
促衰变因子的简介
Davitz等（1986）通过用磷脂酰肌醇（PI）特异性的磷脂酶C（PI-PLC）处理人外周血细胞可释放DAF的事实探明，DAF是经糖磷脂酰肌醇（glycosylphodphatidylinositol,GPI）锚而固定于细胞膜中的。即糖蛋白的C末端共价结合于含PI的糖磷脂上，再经PI插入细胞膜
阵发性睡眠性血红蛋白尿症的发病机制
关于PNH的发病机制，Dacie提出的所谓PNH发病的双重发病学说（dual pathogenesis theory，DPT）是被普遍认可和接受的假说。首先，造血干细胞在一定条件下发生突变，产生GPI缺陷的PNH克隆；其次，由于某种因素（现多认为是免疫因素），发生造血功能损伤或造血功能衰竭，PNH克
简述阵发性睡眠性血红蛋白尿症的发病机制
关于PNH的发病机制，Dacie提出的所谓PNH发病的双重发病学说（dual pathogenesis theory，DPT）是被普遍认可和接受的假说。首先，造血干细胞在一定条件下发生突变，产生GPI缺陷的PNH克隆；其次，由于某种因素（现多认为是免疫因素），发生造血功能损伤或造血功能衰竭，PN
有关阵发性睡眠性血红蛋白尿的病因的介绍
阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的骨髓因受到某种有害因素的损伤，而引起造血细胞的基因突变，产生病理性克隆，这种异常细胞达到一定数量后，则可发病。 PNH 的红细胞有许多异常，其中最重要的是对补体溶血的敏感度显著提高。已证明本病造血干细胞的PIGA基因发生突变，导致糖磷脂酰肌醇锚磷脂合成障碍。多种调节细
阵发性睡眠性血红蛋白尿的病因
阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的骨髓因受到某种有害因素的损伤，而引起造血细胞的基因突变，产生病理性克隆，这种异常细胞达到一定数量后，则可发病。 PNH 的红细胞有许多异常，其中最重要的是对补体溶血的敏感度显著提高。已证明本病造血干细胞的PIGA基因发生突变，导致糖磷脂酰肌醇锚磷脂合成障碍。多种调节
H因子
五、H因子 H因子由Nilson等（1965）发现，根据电泳位将其命名为β 1 H，而Whaley和Ruddy则将其命名为C3b灭活剂加速因子。现已确定其为由1213个氨基酸组成的单链糖蛋白，分子量155kDa，既有长杆状部分，也有球形区域。新近用透射电镜检查发现，H因子的影象为一长而柔顺的分子。
获得性红细胞膜缺陷性贫血的检验结果是什么？
阵发性睡眠性血红蛋白尿症是一种后天获得性红细胞膜缺陷引起的溶血病。临床上以间歇发作的睡眠后血红蛋白尿为特征。患者造血干细胞的糖化磷脂酰肌醇（GPI）基因发生突变，导致其合成障碍。多种调节细胞对补体敏感性的蛋白都属于GPI锚连接蛋白，需通过GPI锚连于细胞膜上。其中最重要的是分化抗原CD59（又称为反
细胞膜上能增强C3b对H因子亲和力
已发现其有5个变异型，编码H因子的基因定位于人的第1号染色体的长臂32区。即FH1-5H因子的核苷酸序列已进行了鉴定，并推导出其全部氨基酸的一级结构，含有20个SCR借此与C3b结合。H因子与MCPCR1CR2DA F及C4bp具有同源性，共同属于补体激活调节剂(RCA 基因家族的成员。 根据电泳
生物分离纯化系统
生物分离纯化系统是一种用于水产学领域的分析仪器，于2018年12月5日启用。 技术指标 系统泵：双泵四泵头，每个泵头都有独立除气阀，每个泵后都有润洗通路，润洗泵的柱塞杠，延长泵的使用寿命；流速0.001-25ml/min（单泵）；装柱可以双泵模式运行，达到0.1–50ml/min；压力范围0
细胞分离纯化技术
实验方法原理 常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F/H）分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，水性高，平均分子量为400000，当密度为1.2 g/ml仍未超出正常生理性
分离纯化的流程
粉碎：将样品进行破碎，研磨提取：这与我们的筛分差不多，就是在破碎之后，提取符合颗粒大小要求的样品，可以理解为取样。分离：这就要看你们所作的什么实验。大部分是分离样品中的杂质。就相当于提纯。鉴定：也就是分析了。分析样品成分呀，化学性质什么的。
分离纯化的流程
粉碎：将样品进行破碎，研磨提取：这与我们的筛分差不多，就是在破碎之后，提取符合颗粒大小要求的样品，可以理解为取样。分离：这就要看你们所作的什么实验。大部分是分离样品中的杂质。就相当于提纯。鉴定：也就是分析了。分析样品成分呀，化学性质什么的。
细胞分离纯化技术
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 实验方法原理 常用来分离人外周血单个
细胞分离纯化技术
Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞实验方法原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低（
蛋白分离纯化步骤
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎.常用的破碎组织细胞的方法有：1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎.常用设备有
蛋白分离纯化步骤
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎.常用的破碎组织细胞的方法有：1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎.常用设备有
细胞分离纯化技术
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 实验方法原理 常用来分离人外周血单个
分离纯化的流程
粉碎：将样品进行破碎，研磨提取：这与我们的筛分差不多，就是在破碎之后，提取符合颗粒大小要求的样品，可以理解为取样。分离：这就要看你们所作的什么实验。大部分是分离样品中的杂质。就相当于提纯。鉴定：也就是分析了。分析样品成分呀，化学性质什么的。
分离纯化总RNA
1） 用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取纯化组织和细胞中的RNA1. 选取从组织细胞或细胞中提取RNA的适宜方法组织a. 分离组织并立即置于液氮中。b. 将约100 mg冰冻组织含液氮的研钵中，用研棒研磨。研磨过程中可加入液氮使组织保持冰冻状态。c.
mRNA提取、分离纯化
从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之
补体激活途径介绍
补体激活途径之一。指微生物或外源异物直接激活C3，在B因子、D因子和备解素参与下，形成C3转化酶与C5转化酶，最终形成攻膜复合物。
免疫学实验C3肾炎因子介绍
C3肾炎因子介绍： C3肾炎因子(C3Nef)是旁路途径C3转化酶(C3b，Bb)的一种IgG类自身抗体，C3Nef与C3b、Bb按1∶1∶1比例结合，可以使此酶稳定，免遭C3b-INA和B1H的灭活，从而导致C3和其他补体成分经旁路途径活化。检测C3Nef时，一般将正常人血清与待测血清在EG
mRNA的分离与纯化
真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）
蛋白质分离纯化
蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。