从有限的细胞中提取RNA实验

LCM 帽子

乙醇 糖原 RNA 提取试剂盒  超纯水

移液器

一、材料

1. 缓冲液、试剂和溶液

75% 乙醇 (超纯水配制）

糖原，5 mg/ml(Ambion，Austin，TX)

StratageneRNA 提取试剂盒（200345，StratageneCloningSystems，LaJolla,CA)，

包括变性溶液、饱和酚 (存于 4°C)、β-巯基乙醇 (存于 4°C)、氯仿：异戊醇、

2mol/L 乙酸钠、异丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分离试剂盒（KIT0202，Arcturus，

MountainView,CA)

DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories，Houston，TX)(4°C 储存）

2. 特殊设备

移液器

无 RNA 酶的 1.5 ml 管子

3. 细胞和组织

来自方案 3 的 LCM 帽子

二、方法

1. 加入 200ul 变性溶液和 1.6ulβ-巯基乙醇到 0.5 ml 管子中。

2. 将 LCM 帽子插入管子，涡旋 5s。

3. 倒置管子孵育 5 min。

4. 移去 LCM 帽子。这一步获得的样品可以在-80°C 保存 6 个月。

5. 将溶液转移到 1.5 ml 管子中。

6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸钠，温和混匀。

7. 加入 220ul 水饱和的酚（底层），温和混匀。

8. 加入 60ul 氯仿：异戊醇，剧烈晃动。

9. 放于冰上 15 min。

10.14000r/min4°C 离心 30 min。

11. 吸上层溶液到新管子中。

12. 加入 2ul 糖原（最终浓度 10~150ug/ml)。

13. 加入 200ul 冷异丙醇。

14.-80°C 过夜。