从脂肪组织提取蛋白的方法

从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤，从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易，但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂肪组织有白色和棕色脂肪两种类型，被称为白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）。

脂肪组织中含有许多脂滴，蛋白质含量小于细胞总数的 2%。低蛋白含量使得从脂肪中分离高浓度蛋白ji具挑战性。以下是几种从脂肪组织中提取蛋白的方法：

A.RIPA 缓冲液提取法：脂肪组织通过含有表面活性剂的缓冲液（例如 RIPA 缓冲液）匀浆，离心后，收集脂肪层下的液体组分为蛋白质，这种方法是相对简单的，但是蛋白质的产量非常低，因为表面活性剂经常导致蛋白质形成微小颗粒导致蛋白丢失。

B. 有机溶剂萃取 TCA 沉淀法：有以下三种方法：

1）脂肪组织通过蔗糖密度梯度离心，丙酮中加入三氯yi酸（TCA）-20℃ 过夜沉淀蛋白。

2）脂肪组织用有机溶剂提取液裂解（氯仿和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。

3）脂肪组织用有机溶剂提取液（TEF 和氯仿）匀浆，通过离心将水相和氯仿相 分离，将其上的水相和交界面去除，并通过离心蒸发干燥。以上三种方法的共同问题是操作繁琐，产量低。

C. 离心管柱提取法：这种方法利用了一种新的蛋白质提取技术，脂肪组织通过无表面活性剂的缓冲液匀浆，水油乳状液通过简单的冷冻后，离心使其通过特殊的离心管柱（有孔径，表面性质被处理过的）提取。