体内耐药细胞株的建立实验

实验方法原理 细胞与低剂量的药物长期接触，引起细胞本身药物化学过程的改变，细胞膜上出现Pgp糖蛋白，使细胞逐渐对药物耐受，随着药物浓度的递增，其耐受程度逐渐加强。

实验材料 小鼠瘤株

试剂、试剂盒 肝素生理盐水

仪器、耗材 离心机

实验步骤

一、材料准备

1.  动物选择：根据欲建立的耐药细胞株，选择合适的动物。在实验期间，一般选择同性别动物进行实验，动物体重的选择以雌性约17~21 g，雄性约18~22 g 为宜。

2.  瘤株的选择：常见的瘤株均可，应依据研究目的、方向确定实验用瘤株，考虑到传代方便，且容易观察或检测，多选择腹水性肿瘤。

二、实验步骤

1.  所试药物的毒性测定

（1）把小鼠随机分成5~8组，每组10~20只小鼠，每只动物每天给予定量的药物，每天1次，连续给药5天，然后观察30天。

（2）记录30天内动物的死亡数。药物的剂量应能使动物的死亡率从0~100%。

（3）计算LD10及95%的可信限，耐药株建立的最初剂量约为1/6LD10。

2.  瘤细胞生长测定

（1）用传代第7天的腹水癌细胞给每只动物接种15×106个细胞，7天后处死动物，开腹，收集全部腹水，腹腔用含150 IU的肝素生理盐水冲洗3次。

（2）合并腹水及冲洗液进行瘤细胞计数，腹水5 500 g 离心5 min，测定瘤细胞压缩体积。

（3）统计不同剂量用药组及对照组的瘤细胞压缩体积，可以测出药物对肿瘤细胞生长的影响。

（4）药物剂量一般在LD10时，能完全抑制敏感株肿瘤细胞的生长。