使用Trizol纯化RNA实验

磨细的组织

Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇 DEPC处理过的水

一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
Trizol(Invitrogen)
氯仿
异丙醇
乙醇，75%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制
DEPC 处理过的水
2. 细胞和组织
50~100 mg 已磨细的组织
二、方法
1. 将 lmlTrizol 加到含 50〜100 mg 磨细组织的微董离心管中。室温下温育 5 min。
组织被磨细有助于 Trizol 将其裂解，这一点很重要。
2. 加 200ul 氯仿，将管颠倒数次以混合。
不推荐进行振荡，因之可导致基因组 DNA 的剪切和 RNA 制备物中 DNA 污染过多。
3. 室温温育 3 min，1500 g 离心 15 min。
4. 将液相转移到一新管。加 500ul 异丙酵。室温温育 l0 min。
5.1500 g 离心 l0miri。RNA 将可见于管底。
6. 移弃上清，小心避免扰动沉降物。
7. 加 1 ml75% 的乙醇。重悬 RNA。4°C 下 1500 g 离心 5 min。
8. 移弃乙醇并风干 RNA。
9.RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。
当使用以酚为基础的试剂时，为得到足够高的纯度，对得到的 RNA 进行笫二轮酚-氯仿抽提可能是必
要的。