1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片，交叉放入玻片盒（每边约6片）或加湿盒中。勿使载玻片相互接触。
2) 待载玻片达到室温且未干时，于切片上铺加PBS，勿使溢出玻片。
3) 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min (每一载玻片上加40〜 50μL抗体，应能盖住切片）。
4) 用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1 h。
5) 以PBS洗玻片3次（5 min/次)。
从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。
6) 稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min。以每载玻片40〜50μL抗体计。
7) 将第二抗体加于切片上，置加湿盒中室温温育1 h。以PBS洗玻片3次（5 min/次)。
8) 将盖玻片放于纸巾上，滴加1滴Gelvatol于盖玻片中央。翻转载玻片放于盖玻片上，勿施压。将玻片置工作台上，用铝箔覆盖避光放置30 min，使Gelvatol凝结。
9) 显微镜下观察结果，或置玻片盒中储于4℃。 展开 | 