免疫荧光技术简介

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，根据抗原抗体反应的原理，将荧光素偶联到已知的抗原或抗体上制成荧光探针，与血清或体液、细胞、组织中存在的相应抗体（或抗原）结合，从而对这些组织中存在的抗原或抗体进行定性、定量和（或）定位的检测。

用于荧光标记的抗体，应遵循以下几个原则：特异性强、高纯度、效价满意（>1:20），最好采用单克隆抗体。

用于抗体标记的荧光素需要具备以下条件：能够与蛋白质形成稳定的共价键；标记后不影响蛋白质和自身的生物学活性；荧光效率高，标记后荧光强度下降不明显；荧光色泽与背景色泽对比鲜明；标记方法简单、快速；安全无毒。

荧光抗体的保存原则是：防止抗体失活；保持荧光素不脱落和不淬灭。

免疫荧光技术的染色方法分为直接法和间接法。直接法的原理是将荧光标记的抗原/抗体直接与相应抗体/抗原反应，多用于流式细胞仪分析。直接法的优点是操作简便、特异性高，非特异性荧光染料少。但直接法的灵敏度偏低，而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体，若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体。间接法的原理是先用未标记的抗体进行标记，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体；然后加上荧光标记的二抗，使之与已经结合在抗原上的一抗结合。