兔红细胞玫瑰花环试验

实验概要

本实验介绍了兔红细胞玫瑰花环试验操作流程。玫瑰花环试验，又称为花结试验。是测定淋巴细胞数量和功能的一种方法。

人类T和B淋巴细胞表面具有不同的受体。由于人类T淋巴细胞表面具有与绵羊红细胞结合的受体，能与绵羊红细胞非特异性结合，形成E花环，因此，T细胞也成为红细胞花瓣形成细胞。根据E—玫瑰花环形成率，可以间接判断机体细胞免疫力。目前，已广泛应用于临床，作为测定人群免疫状态的一个指标。

主要试剂

1. 肝素(100单位/毫升)

2. 0.5%兔红细胞悬液(用Hanks液配制)

3. 吸收过的胎牛血清：

取经56℃30分钟加热灭活后的胎牛血清加半量压积兔红细胞混合后，37℃水浴20分钟，2000转/分离心10分钟，取上清液即成。

4. Hanks液

5. 豚鼠抗凝血

6. 淋巴细胞分层液

主要设备

灭菌注射器，针头，试管，吸管等。

实验步骤

1. 淋巴细胞提取

   1) 取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上(沿管壁轻轻加入，勿使两液相混)。

   2) 2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1-2次，(1500转/分离心10分钟)弃上清即成。

2. 加吸收过的胎牛血清0.1毫升，0.5%兔红细胞悬液0.2毫升，于淋巴细胞中。混合后，37℃水浴5分钟。

3. 500转/分离心5分钟，放4℃冰箱中2小时后，弃大部分上清。

4. 染色及观察

轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液，混合，10分钟后取一滴放载玻片上，加盖玻片镜检。

高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞，凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性，计算花环形成细胞的百分率。