全国生物医药色谱会分会报告集锦(二)

　　2012年4月22日，全国生物医药色谱及相关技术学术交流会各分会在美丽的重庆大学虎溪校区继续进行。“理论与方法”分会场，侧重对色谱新理论及新方法的探讨。涉及当前生物医药领域的前沿、热门话题，有较高的学术性和前沿性。以下是个报告的精彩内容。

中国科学院大连化学物理研究所 许国旺主任

　　首先来自中国科学院大连化学物理研究所代谢组学研究中心主任许国旺研究员将他在代谢组学中的研究所得分享给大家。报告的题目是“代谢组学中提高代谢物分析灵敏度的新方法研究”。

　　1.代谢物的分析特点

　　许研究员提到，代谢组学是生命科学各领域研究小分子的有利工具，在病变标志物发现、疗效判断和病理研究中发挥积极的作用。由于代谢物在数量、种类、浓度、极性等方面的广泛分布，单一的分析技术不能分析整个代谢组，因此需要多平台和多方法的集成。

　　2.色谱-质谱代谢组学方法的不足

　　基于色谱-质谱的代谢组学方法中，会遇到共存的高浓度代谢物影响低丰度的物质的分析的情况。同时，一些极性代谢物，在反相柱上保留不好，而且在质谱检测中离子化效率极低，影响了此类代谢物的分析。而这些极性代谢物，通常含量很低又富有生物功能。

　　3.‘拟’靶向代谢组学新方法

　　基于此因，许研究员课题组发展了‘拟’靶向的代谢组学方法，找出各代谢物质谱检测的离子对，将非靶向方法中的全扫描方式转变成靶向分析中的多反应检测，以整体提高代谢组的分析灵敏度。同时，选择性消除高浓度代谢物，并将衍生化与UPLC-MS的检测相结合，极大地提高了痕量极性化合物的分析灵敏度。

东曹(上海)生物科技有限公司 张琳

　　来自东曹(上海)生物科技有限公司张琳博士以“新型蛋白质分析用大孔径反相色谱柱的性能评价及其在单克隆抗体样品分析中的应用”为题，介绍了TSKgel Protein C4-300的特点和优势。

　　张博士介绍说，新型蛋白质分析用大孔径反相色谱柱—TSKgel Protein C4-300被成功开发并应用于单克隆抗体样品的分析。针对蛋白质样品特点，结合填料孔径、配基链长、键合密度、酸性条件下耐久性实验确定新型色谱柱填料特性参数。

　　分离性能考察

　　1.采用几种标准蛋白质样品，考察各种色谱参数：柱温、流速、三氟乙酸浓度对蛋白质分离的影响，并与其他反相色谱柱进行对比分离实验。结果表明：新型色谱柱分析蛋白质具有高分辨率、高回收率、酸性条件下高耐久性等特点。

　　2.采用TSKgel Protein C4-300色谱柱对IgG蛋白质酶解产物样品在尺寸排阻模式下分离馏分进行分析。结果表明：尺寸排阻色谱柱的各馏分在TSKgel Protein C4-300色谱柱获得了更精细的分离，说明反相色谱柱与尺寸排阻色谱柱联合可获得更多信息。

天津商业大学 姜子涛教授

　　来自天津商业大学姜子涛教授以题为“Sol-gel法合成钛胶整体HPLC柱及其在羧酸分析中的应用”作报告

　　姜教授说，钛胶(TiO2)具有极好的化学稳定性和表面性质，对羧酸、生物碱、磷酸蛋白(肽)等有较强的吸附选择作用。姜教授以Ti(OiPr)4为钛源、醋酸做螯合剂、盐酸做催化剂通过Sol-gel法合成具有较高比表面积的钛胶整体HPLC柱，所合成的钛胶整体柱为锐钛矿型，比表面积为88m2/g，平均孔径为9 nm。并应用于羧酸类化合物的分析，分离结果较好。

中国科学院化学研究所 黄嫣嫣

　　来自中国科学院化学研究所黄嫣嫣做的报告是“DMSO加速的色氨酸快速检测新原理研究”。

　　黄嫣嫣介绍说，基于DMSO对色氨酸在HCl/HCOOH中显色反应具有“催化”或“抑制”双重效应的新现象，利用反相高效液相色谱与液质联用等分析方法开展了机理研究。

　　结果显示，DMSO催化显色反应的原因在于“偶极非质子溶剂效应”;而生成无色副反应则是高含量DMSO抑制显色现象的根源所在。

　　基于上述反应机理进行反应条件优化，发展了一种快速、简便、高选择性的色氨酸及含色氨酸残基多肽、蛋白质的可视化检测方法，大大提高了灵敏度和检测效率，为相关多肽、蛋白质的构效关系研究以及疾病机制阐明提供有效的借鉴。

武汉大学药学院 张玉林

　　来自武汉大学药学院张玉林的报告题目是“L-高脯氨酸修饰的硅胶整体柱及其在手性氨基酸的毛细管电色谱分离与质谱检测联用分析中应用”。

　　张玉林介绍说，他们研制成功的L-高脯氨酸修饰整体柱对铜离子具有特征络合作用，经Loading铜离子后，可以在无铜离子的缓冲液中对丹酰化氨基酸进行LE-CEC分离与MS检测。

　　对于手性氨基酸分离的电色谱性能，研究了分离条件等对手性拆分的影响。结果表明：在优化的色谱和质谱条件下对多种丹酰化氨基酸实现了较好的CEC分离及MS检测，结果具有较好的重现性和稳定性，柱使用寿命较长。

北京理工大学生命学院 孟朝阳

　　来自北京理工大学生命学院孟朝阳带来了“亲和毛细管电泳法测定大肠杆菌原生质体与ssDNA库作用的结合常数”的报告。

　　报告中提到，亲和毛细管电泳测定大肠杆菌原生质体与单链DNA(single-stranded DNA，ssDNA)相互作用的结合常数方法，用于表征原生质体与核酸适配体的结合能力。

　　实验中固定溶质ssDNA库的浓度不变，将大肠杆菌原生质体作为配体添加到电泳缓冲液中，改变电泳缓冲液中配体的浓度，由溶质迁移率和配体浓度的关系求算原生质体与ssDNA库相互作用的结合常数。

　　经过实验表明，亲和毛细管电泳法可以作为研究原生质体与核酸相互作用评价和表征简便方法，可用于小分子与微生物的相互作用研究。