全新的蛋白质标签实现灵敏且定量的蛋白检测

　　Promega的科学家近日开发出一种新方法，可对细胞内的蛋白质进行轻松检测。这种称为HiBiT的多肽标签可与任何蛋白质相连接，从而实现高度定量且极其灵敏的生物发光检测。这样无需使用抗体，即可利用生物发光对蛋白进行定量。

　　HiBiT只有11个氨基酸，因此很容易与CRISPR/Cas9基因编辑技术相结合，精确插入基因组，从而使研究人员能够在生理相关条件下研究蛋白质。这种方法改变了传统的蛋白检测，不仅节省时间，也提高效率和精度。

　　检测低丰度蛋白

　　许多低丰度蛋白在细胞中发挥重要作用，不过难以检测和定量。HiBiT检测是基于生物发光，因而比荧光检测方法（如GFP）更加灵敏。这让研究人员可以检测极低水平的蛋白质。不光灵敏，它也是高度定量的。连续稀释的HiBiT标记蛋白产生了至少7个数量级的线性检测范围。

　　更加高效地标记

　　如何追踪内源蛋白质？标记它！如今，最轻松的方法是利用CRISPR/Cas9基因组编辑来插入报告基团，如GFP或萤光素酶。不过，这些报告基团很大，通常需要质粒供体，因此插入效率很低。而HiBiT非常小，只需要单链寡核苷酸（ssODN）供体，插入效率一下子就提高了很多。

　　无需克隆和等待

　　若要给目的蛋白加上GFP报告基因，那就需要分子克隆操作，这不仅费时，也很麻烦。相比之下，HiBiT只需要ssODN供体，所有组分都可以直接订购。检测过程也很简单，只需在细胞中加入Nano-Glo HiBiT Lytic Detection Reagent，等待10分钟，将微孔板放在检测仪上即可。这个过程可比抗体检测的封闭、孵育和洗涤快多了。

　　实时检测活细胞

　　蛋白质是高度动态的，例如，HIF1α的表达在缺氧条件下增加，而在氧气供应后迅速降解。之前，人们每隔几分钟裂解一次细胞，然后开展Western blot。现在有了HiBiT，研究人员能够实时监控活细胞。有人曾做过实验，在恢复氧气供应后每隔30秒监控HiBiT编辑过的细胞，发现HIF1α-HiBiT的半衰期不到6分钟。如果有生物发光显微镜，还能够实时观察蛋白质处于什么位置。