关于柱压的几个问题

一、问：这段时间一直在做生物碱，流动相选择的是乙睛：0.02mol/l磷酸二氢钾（26：74），现在实验做完了，最后冲柱子。先长时间乙睛：水冲柱，再用甲醇：水冲柱，最后用甲醇冲柱。柱压一直很高，请问各位，是否不该这样冲柱？该怎样解决？

Jimmy_ok：乙睛和甲醇没有多大区别的，只是乙睛黏度小，对于柱子保护有利，当然价格也高些，个人感觉完全可以用甲醇替代冲柱（当然实验室有钱就另说了）。从你的流动相上看，水性比例较大，且使用缓冲盐。所以冲柱子建议先5%甲醇1小时，然后50%甲醇，80%，100%甲醇各0.5小时，第二次开机时先用5%甲醇冲20分钟后再换流动相。柱压过高时可以采用低流速，长时间来冲。顺便提一句，流动相和样品都要严格过滤的！

adashuishui：

我的建议：

1、如果你做最后一个样品的时候柱压还是正常的，那么可能就是冲柱出现了毛病。由于你的流动相采用了较大比例的缓冲盐，因而冲柱的时候要采用含水相较多的溶液低速冲洗，如果有机相的比例过高，磷酸二氢钾有可能结晶析出导致柱压升高。

2、如果你做最后一个样品的时候柱压已经很高，那就是样品造成的。此时色谱柱的柱头已经遭到污染，因而需要清理。方法有：A、用流动相低速反冲；B、打开柱头，将污染物刮去（只有很薄的一层，大约3mm)，然后用相同类型的已经废弃的色谱柱的出口端的填料将柱头填平（以少量甲醇调成膏状）。

3、小心不要随便用别人用过的冲柱液，因为长时间放置的液体有可能进入粉尘，也有可能长菌。因而一定要保证其是干净的，没有颗粒存在（要过滤后使用）。

pantherww：

1、我想你应该注意一下你的甲醇是不是HPLC级的，不是的话就应该先过滤在使用。

　　2、你可以不用乙睛，毕竟成本太贵，而且效果和甲醇差不多，先用100%的甲醇冲洗20分钟，再用甲醇：水（50：50），冲洗30分钟即可。

　　3、如果柱压还是太高，可以用甲醇：水（50：50）反冲柱子1小时，再正冲30分钟。

　　4、注意是否是预柱堵了。

　　5、HPLC仪器有它自己的一个滤器，可以考虑更换里面的滤芯。

zslnutcm：由于流动相中有磷酸盐，所以实验结束时先用乙睛冲柱，有机溶剂会造成无机的磷酸盐析出，堵住了管路。建议先用温的纯水冲洗管路，看看能不能使压力降下来，再把泵的滤头拆下来，用甲醇超声清洗一下，或者干脆换个滤膜，应该会对你遇到的问题有帮助。

toyosa：一般柱压过高是最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、如果你有保护柱的话，拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

　　2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。

　　3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动性)。这时，如果柱压仍不下降，再检查；

　　4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与柱子的厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。