照高效液相色谱法（中国药典1990年版二部附录34页）测定。
系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以戊烧磺酸钠溶液[取戊烷磺酸钠0。96g与乙二胺四醋酸二铜1。86g，加醋酸液（0。08mol/L）使溶解并稀释至1000ml，用氨水调节PH值至4。3]-甲醇-乙睛（64：22：14）为流动相，检测波长为291nm，理论板数按培洛霉素峰计算应不低于700。
测定法 取本品5瓶，称出平均装量，取内容物，混匀。精密称取适量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，摇匀，取10-20μl注入液相色谱仪，另取硫酸培洛霉素对照品同法测定，按外标法计算供试品中培洛霉素的含量，即得。