1、高压匀浆破碎法(homogenization)
高压匀浆器是常用的设备,它由可产生高压的正向排代泵(positive displacenemt pump)和排出阀(discharge valve)组成,排出阀具有狭窄的小孔,其大小可以调节。细胞浆液通过止逆阀进入泵体内,在高压下迫使其在排出阀的小孔中高速冲出,并射向撞击环上,由于突然减压和高速冲击,使细胞受到高的液相剪切力而破碎。在操作方式上,可以采用单次通过匀浆器或多次循环通过等方式,也可连续操作。为了控制温度的升高,可在进口处用干冰调节温度,使出口温度调节在20℃左右。在工业规模的细胞破碎中,对于酵母等难破碎的及浓度高或处于生长静止期的细胞。
2、振荡珠击破碎法 (Skaking Bead)
将等体积的小量组织样品与高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋盖微量管中,再加入缓冲液与稳定成份到1.5ml的体积,用6500RPM振汤机高速上下振动8秒,休息8秒,再振动8秒即可。此方法是目前最快且一次可处理最多样品的方法。 一台机器最多可以在一天处理2400支样品。对小量且多样的人很方便。
3、高速搅拌珠研磨破碎法(fine grinding)
研磨是常用的一种方法,它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌,使细胞获得破碎。在工业规模的破碎中,常采用高速珠磨机 。
4、超声波破碎法(ultrasonication)
超声波破碎法利用超声波振荡器发射的15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。 超声波振荡器有不同的类型,常用的为电声型,它是由发生器和换能器组成,发生器能产生高频电流,换能器的作用是把电磁振荡转换成机械振动。超声波振荡器以可分为槽式和探头直接插入介质两种型式。
1、细胞破碎的非机械法—渗透压冲击破碎法(osmoticshock)渗透压冲击是较温和的一种破碎方法,将细胞放在高渗透压的溶液中(如一定浓度的甘油或蔗糖溶液),由于渗透压的作用,细胞内水分便向外渗出,......
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高压均质机是由一个高压柱塞泵及特殊结构的均质阀组成,需处理的物料在柱塞所造成的高压条件下进入可调节压力大小的阀组中,失压后的物料从可调节限流缝隙中以极高的流速(1000米/秒,最高可达1500米/秒)......
细胞破碎,细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。......