茚三酮反应的显色方法有下列数种:
一、常用法
将点有样品的层析或电泳完毕的滤纸充分除尽溶剂,用 5g/L 茚三酮无水丙酮溶液喷雾,充分吹干,置 65℃烘箱中约 30min(温度不宜过高,避免空气中氨,以免背景泛红色),氨基酸斑点呈紫红色。
二、使各种氨基酸呈现不同颜色的方法
1、用 0.4g 茚三酮,10g 酚和 90g 正丁醇的混合液显色。
2、用 1g/L 茚三酮无水丙酮溶液显色完毕后,再用盐酸蒸汽熏 1min。
3、用 1g 茚三酮,600mL 无水乙醇,200mL 冰醋酸及 80mL2,4,6-三甲基吡啶混合液 80℃染色 5~10min。
三、使显色稳定的方法
1、配制含醋酸镉 2g 加蒸馏水 200mL 及冰醋酸 40mL 的贮存液。将上述贮存液加 200mL丙酮及 2g 茚三酮,即为显色液。点有样品的滤纸上浸有此显色液后,放置于盛有一小杯浓硫酸的密闭玻璃容器中,25℃,18h,或较高温度下适当缩短时间。背景色浅,氨基酸斑点也比较稳定。
2、用含 2g/LCoCl2(或 CuSO4)的 4g/L 茚三酮异丙酮溶液显色时,氨基酸斑点呈红色,也可在茚三酮显色后喷以含钴、镉或铜等无机离子的异丙醇溶液,斑点自蓝紫色变成红色。
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