氨基酸总量测定：茚三酮比色法

1原理：氨基酸在一定pH范围内，能与茚三酮生成兰紫色化合物。可以用比色法定量测定。

2试剂：

（1）磷酸缓冲液（pH.8.04）制备方法如下：

称磷酸二氢钾4.5350g。定容500ml

称NAH₂PO₄·12H₂O   11.9380g分别溶解定容500ml

取磷酸二氢钾10ml与磷酸氢二钠190ml混合即为pH8.04的缓冲液

（2）2%茚三酮溶液：

称茚三酮1g→溶于35ml热水→加入40mg氯化亚锡（SnCl₂·H₂O）搅拌过滤（作防腐剂）→

于冷暗处过夜→定容50ml

①  氨基酸标液

称干燥氨基酸（如异亮氨酸）0.2000g→溶解定容100ml→摇匀→吸10ml于另外100ml容量瓶

定容100ml，即得200Ug/ml标液

3操作方法：

（1）绘制标准曲线：

取7个25ml容量瓶，吸取标液 0   0.5   1.0   1.5   2.0   2.5   3.0ml于7个25ml容量瓶，加水补充

至容积为4ml，然后加茚三酮和缓冲液各1ml，于水浴加热15分钟，冷却后定容25ml，静置

15分钟，在570nm下测消光值，绘制标准曲线。

（2）样品测定：

取样品5.00~10.0g（液体样5-10ml）→于烧杯中→加50ml水和活性碳约5g→加热过滤→用

30—40ml热水洗涤活性炭→吸澄清样液1~4ml→加茚三酮和缓冲液各1ml水浴加热15分钟，

冷却定容，静置15分钟于570nm下测定消光值，按下式计算氨基酸含量。

氨基酸含量（毫克/100克）=C/（W×1000）×100

C——从标准曲线上查得得氨基酸的量（Ug）

W——测定得样品溶液相当于样品的量（g）

注意事项：

茚三酮受阳光、温度、湿度、空气等影响易被氧化呈淡红或深红色，使用前要进行纯

化，方法如下：、

取10g茚三酮容于40ml热水中，加一克活性炭，摇匀静置30分钟，过滤，将滤液放入冰箱中

过滤，即出现兰色结晶，过滤，用2ml冷水洗涤结晶，置干燥皿中干燥，装瓶备用。