冻干机应用案例：超滤技术应用于穿琥宁冻干粉针的研究

【关键词】 超滤技术

【摘要】 目的 提高穿琥宁冻干粉针质量。方法采用“高纯度穿琥宁生产工艺”ZL超滤技术生产穿琥宁冻干粉针并与其它厂家同类产品进行动物急性毒性试验比较。结果超滤技术生产的注射用穿琥宁ld₅₀ 明显高于其它厂家生产的同规格产品，单次静脉给药的ld₅₀ 达到910mg/kg，而国家标准说明书中的ld₅₀ 为675mg/kg，文献资料报道穿琥宁注射剂的单次静脉给药的ld₅₀ 为580～620mg/kg。结论超滤技术可以大大降低注射用穿琥宁产品的毒性，提高临床安全性。

注射用穿琥宁是采用爵床科植物穿心莲提取物―穿心莲内酯经酯化、脱水、成盐而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，加入ph调节剂、碳酸氢钠等药用辅料经冷冻干燥而制成的供肌肉注射或静脉滴注用的无菌冻干粉针。用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染等。穿心莲性寒、味苦，能清热解毒，消炎止痛。可用于急性细菌性痢疾、急性胃肠炎、扁桃体炎、咽喉炎等。我国科研工作者于70年代初对穿心莲提取物成分进行了深入研究，结果表明，有效成分为其二萜类内酯化合物。因二萜类内酯化合物均难溶于水，无法满足临床需要，通过在内酯结构中引入不同的亲水基团，增加内酯的水溶性，目前已制成了多种穿心莲内酯针剂，穿琥宁即是抗炎解热作用最强者，目前在临床上已得到广泛应用，1992年被国家中医药管理局批准为全国中医院急诊科（室）首批必备中药之一。

我们通过北京图书馆对近年在医药刊物发表的有关穿琥宁86 篇论文进行分析，在24篇专题报道不良反应的文章中，除1篇只写“使用穿琥宁”外，其余23篇所报道的全部是水针剂。专家认为:穿琥宁水针剂不稳定，在室温条件下有效期为30.5天，因穿琥宁为一个二萜类内酯化合物，而且分子中有一共轭双键，因而化学活性高，易发生水解反应和氧化反应，生产中还要进行高温灭菌，这又促进了分解反应。纯净穿琥宁水溶液微黄略显绿色，但国内市场上穿琥宁水针剂的色泽深，有的甚至变成了黄色或棕黄色。穿琥宁水针剂的毒副反应主要为婴幼儿泄泻，发生率为22%;个别有白细胞锐减、过敏性休克、药疹、抽搐、瘙痒、高热、寒颤、呼吸困难、紫癜等。为了提高穿琥宁冻干粉针剂的质量，本试验研究了“高纯度穿琥宁生产工艺”ZL超滤技术，应用于该产品生产并与其它厂家同类产品进行的动物急性毒性试验情况。

1 生产工艺

1.1 仪器 88-2型切向流超滤器，cl-25蠕动泵（军事医学科学院）;millipore超滤膜堆（截留分子量:5000）;Pilot2-4型冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）;西林瓶洗、烘、灌联动生产线。

1.2 药品与试剂穿琥宁（注射级，成都天台山制药有限公司）;碳酸氢钠（注射级，上海虹光化工厂）;右旋糖酐40（注射级，漯河华颖药业有限公司）;活性炭（针用，上海活性炭厂）;灭菌注射用水（本厂生产）;乙醇（药用，南阳天冠集团酒精厂）;盐酸、氢氧化钠均为分析纯试剂。

1.3 生产工艺（应用超滤技术）（1）在无菌室（百级）配料间内，将穿琥宁（原料药）溶于50%乙醇，加0.5%～1%活性炭（注射级），在25～30℃温度下，用盐酸调ph为 6.5～6.7，搅拌30min，吸附原料在生产过程中因暴露空气而带进的热源物质，充分回流，使色泽下降两个色级;用分子截留量5000的超滤膜进行超滤，将5000以上分子量的大分子植物蛋白截留下来;超滤液经重结晶后用无热原注射用水淋洗、滤干，进入配料工序。（2）按千支计算，在无菌室（百级）配料间内，精密称取经计算后处方量的穿琥宁精制品，搅拌加入1.5%碳酸氢钠（注射级）溶液500ml，至溶解澄清;加10%右旋糖酐40（注射级）溶液 500ml，加无热原灭菌注射用水至3000ml，混合均匀，调ph至7.7±0.2。取半成品检验，定装量，除菌过滤后，冻干，封口即得。

2 急性毒性试验

根据国家药品监督管理局《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则》中化学药品单次给药的毒性研究（即急性毒性试验）指导原则，对注射用穿琥宁进行了急性毒性试验，观察受试药物一次给予动物后所产生的急性毒性反应和死亡情况。

2.1 试验样品

2.1.1 注射用穿琥宁 我公司应用超滤技术试制生产的20020322，规格0.2g，微黄色冻干块状物。临用前以氯化钠注射液稀释至所需浓度。

2.1.2 注射用穿琥宁 我公司受黑龙江某制药公司委托加工生产的200101163批，规格0.2g，微黄色冻干块状物。临用前以氯化钠注射液稀释至所需浓度。

2.1.3 注射用穿琥宁 我公司在市场上购买的某制药公司生产的020503-1批，规格0.2g，微黄色冻干块状物。临用前以氯化钠注射液稀释至所需浓度。

2.2 试验动物 昆明种小鼠，购自河南省实验动物中心，合格证号:医动字第99012号。动物饲料购自河南省实验动物中心，为标准颗粒饲料。

2.3 试验方法与结果（1）试验室温度:（20±1）℃。（2）在预试验的基础上取健康小鼠180只，体重（19.0±2.0）g。雌雄各半，每个批号药物随机分为6组，每组10只。高低剂量的比值设定为1:0.9。根据预试验的结果，将受试药物配制成不同浓度，20020322批号为45.00、40.50、36.50、32.80、29.50、26.60mg/ml; 200101163批号为45.00、40.50、36.45、 32.81、29.52、26.57、23.91mg/ml; 020503-1批号为44.55、40.10、36.09、32.48、29.23、 26.31g/ml，静脉给药，体积为0.25ml/10g体重，给药速度为5s，给药后即刻观察，记录动物的反应和死亡情况。给药后自高剂量组开始，部分动物出现静伏少动、抽搐、四肢瘫软等现象，并呈抑制状态死亡，动物可随受试药物浓度的不同，出现的反应程度和死亡时间不同。死亡多发生在给药后的 30min～48h内，对死亡鼠立即进行尸检，肉眼观察各主要脏器，未见明显异常。对各组存活鼠逐日观察1星期，动物的外观行为、食欲、粪便未见明显异常，试验结束时，存活动物体重分别增长至（25.3±2.7）、（26.1±3.4）、（27.2±3.8）g。实验结果用bliss机率单位计算ld 50 值及可信限，结果见表1、2、3。测得注射用穿琥宁静脉给予小鼠的ld 50 值分别为:批号20020322为910.16mg/kg，其95%可信限为834.84～992.27mg/kg;批号20010163为 804.10mg/kg，其95%可信限为748.51～863.82mg/kg; 批号020503-1为820.70mg/kg，其95%可信限为 758.94～887.49mg/kg。

3 讨论

采用超滤技术生产的注射用穿琥宁ld 50 明显高于其它厂家生产的同规格产品，单次静脉给药的ld ₅₀达到910mg/kg，而国家标准说明书中的ld ₅₀为675mg/kg［8］，文献资料报道穿琥宁注射剂的单次静脉给药的ld₅₀达到580～620mg/kg［2］，因此，大大降低了注射用穿琥宁产品的毒性，提高了本品在临床上使用的安全性。