凋亡中线粒体功能评价实验

细胞

CMXRos 储存液 PBS

1. 使用前用 DMSO 配置 1 mmol/L 的 CMXRos 储存液，建议活细胞使用浓度 25~40 mol/L，后续将固定的细胞使用浓度为 50~200 mmol/L。为减少假象，荧光染料浓度应尽可能低。

2. 如是贴壁细胞，将细胞在盖玻片上于培养皿中培养 24~48 小时。如是悬浮细胞，200 g 离心 5 分钟沉淀约 5X10⁵ 细胞。二者均除去培养基，重置于含有染料探针的预热培养基中，在组织培养条件下孵育细胞 15~45 分钟。

3. 贴壁细胞用 pH 7.2 的 PBS 洗 1 次，将盖玻片移至载玻片上，用装配有校正滤器或相应激光的常规荧光或共焦显微镜直接观测。如悬浮细胞，将细胞沉淀重悬于含 3% BSA 的 100 μl PBS 中，用细胞转瓶 300 g 离心 5 分钟，转至载玻片上。固定载片后用荧光显微镜观测。

4. 为了使样品更稳定，可用新配制的 4% 甲醛-PBS 溶液室温孵育 15 分钟，将细胞固定于盖玻片上或转瓶。然后用 pH7.2 的 PBS 将细胞洗 3 次。

5. 此时可进一步用免疫细胞化学处理固定细胞，以测定细胞抗原的共表达，或同时用 TUNEL 方法检测 DNA 片段大小。