分光光度计光度准确性测试的注意事项

以下是分光光度计光度准确性测试的注意事项：

1. 环境条件：

• 温度稳定：分光光度计应在温度稳定的环境中使用，一般要求温度变化在较小范围内（如 ±2℃），因为温度变化可能导致仪器的光学部件（如光栅、棱镜等）发生热胀冷缩，从而影响波长准确性和光度准确性，通常实验室应配备空调等温控设备来维持温度稳定 5。

• 湿度适宜：环境湿度应保持在适当水平，过高的湿度可能使光学元件受潮，影响其性能，甚至导致生锈等问题，一般建议湿度控制在相对湿度 30% - 85% 之间，例如在潮湿的季节或地区，可使用除湿机来控制湿度 15。

• 避免振动：仪器应放置在平稳、无振动的台面，强烈的振动可能干扰仪器的光路系统，导致测量结果不准确，例如应避免将仪器放置在靠近振动源（如离心机、振荡器等）的地方。

• 无强磁场和电场：强磁场和电场可能对分光光度计的电子部件产生干扰，影响其正常工作和测量精度，所以要远离强磁场和电场设备。

• 避免阳光直射：阳光中的紫外线和红外线等可能对仪器的光学系统和检测部件产生不良影响，同时也可能导致样品温度变化，影响测量结果，因此仪器应放置在避光的位置 2。

2. 仪器校准：

• 波长校准：定期使用标准物质（如低压汞灯、氘灯等）对仪器的波长进行校准，确保仪器在各个波长下的准确性。波长不准确会直接影响到光度测量的准确性，例如对于特定波长的吸收峰，如果波长偏差较大，可能导致吸光度测量值错误 16。

• 光度校准：采用标准滤光片或已知浓度的标准溶液进行光度校准，通过调整仪器的零点和满度（100% 透射比或吸光度），使仪器在不同光度范围内都能准确测量。例如，使用不同吸光度值的标准滤光片进行校准，检查仪器在各个吸光度水平下的测量准确性 16。

• 定期校准：根据仪器的使用频率和稳定性，制定合理的校准周期，一般建议至少每年校准一次，对于使用频繁或对测量精度要求高的仪器，校准周期应适当缩短。

3. 样品准备：

• 样品纯度：确保样品的纯度，避免样品中存在杂质对测量结果产生干扰，如果样品不纯，杂质可能在测量波长处有吸收或散射，导致测量的吸光度不准确，从而影响光度准确性的判断。

• 样品浓度：选择合适的样品浓度，使吸光度值落在仪器的线性范围内。如果吸光度值过高（超过 1.0），可能会导致仪器的响应非线性，测量结果不准确；如果吸光度值过低，可能会受到仪器噪声的影响，使测量精度降低。例如，对于未知浓度的样品，可先进行预实验，确定合适的稀释倍数。

• 样品均匀性：确保样品溶液均匀，没有沉淀、浑浊或分层现象。如果样品不均匀，测量时可能会导致吸光度值的波动，影响测量结果的重复性和准确性，在制备样品溶液时，应充分搅拌或摇匀。

• 空白对照：使用与样品溶液相同的溶剂或空白样品作为空白对照，在测量样品吸光度之前，先测量空白对照的吸光度，并将其从样品吸光度中扣除，以消除溶剂、比色皿等对测量结果的影响 136。

4. 比色皿使用：

• 比色皿选择：根据测量的波长范围选择合适材质的比色皿，石英比色皿适用于紫外光区和可见光区，而玻璃比色皿通常只适用于可见光区。如果在紫外光区使用玻璃比色皿，会由于玻璃对紫外光的吸收而导致测量结果不准确 38。

• 比色皿清洁：使用前和使用后都要对比色皿进行彻底清洗，避免残留的样品或污渍影响测量结果。清洗时可使用适当的溶剂（如蒸馏水、乙醇等），并用干净的软布或镜头纸擦拭干净，严禁用手指触摸比色皿的透光面，以免留下指纹或污渍 348。

• 比色皿配对：如果需要同时使用多个比色皿进行测量，应确保这些比色皿是配对的，即它们在相同波长下的透光率或吸光度差异在允许范围内。在使用前可对比色皿进行比较，选择透光率或吸光度相近的比色皿进行配对使用。

• 比色皿放置：将比色皿正确放置在仪器的比色皿架上，确保比色皿的透光面与光路垂直，且放置位置一致。如果比色皿放置倾斜或位置不准确，可能会导致光程长度变化，从而影响测量结果的准确性。

5. 测量操作：

• 预热时间：在开启仪器后，应给予足够的预热时间，使仪器的光源、检测器等部件达到稳定的工作状态，一般预热时间为 15 - 30 分钟，具体时间可根据仪器说明书确定。在预热期间，不要进行测量操作，以免得到不准确的结果 17。

• 测量波长选择：根据样品的特性和测量目的，选择合适的测量波长。如果对测量波长不确定，可先进行波长扫描，确定样品的最大吸收波长或特征吸收波长，然后在该波长下进行光度准确性测试。

• 测量模式选择：根据样品的性质和测量要求，选择合适的测量模式，如吸光度模式、透射比模式等，并确保仪器的测量模式设置正确。

• 测量次数和重复性：为了提高测量结果的准确性和可靠性，可进行多次测量，并计算测量结果的平均值和标准偏差。如果测量结果的重复性较差，应检查仪器的状态、样品的制备和操作过程等，找出问题所在并加以解决。

• 数据记录和处理：准确记录测量得到的原始数据，包括吸光度值、波长、测量时间等信息。在数据处理时，应按照正确的方法进行计算和分析，避免数据处理错误导致的结果不准确。

6. 仪器维护：

• 定期清洁：定期对仪器的外壳、比色皿架、样品室等进行清洁，去除灰尘和污渍，保持仪器的外观整洁。对于光学部件（如光栅、透镜等），可使用专用的清洁工具和清洁剂进行清洁，但要注意避免损伤光学表面 45。

• 光源维护：光源是分光光度计的关键部件之一，其寿命和性能直接影响测量结果。根据光源的类型和使用情况，定期更换光源灯泡或进行维护保养，例如对于钨灯和氘灯，在使用一定时间后，其发光强度会下降，需要及时更换 146。

• 检测器维护：检测器也需要定期进行检查和维护，确保其正常工作和灵敏度。如果发现检测器的响应性能下降或出现故障，应及时进行维修或更换。

• 干燥剂更换：如果仪器中使用了干燥剂（如硅胶等），应定期检查干燥剂的状态，及时更换失效的干燥剂，以保持仪器内部的干燥环境，防止光学部件和电子部件受潮。