分离小鼠胚胎实验

胚胎是怀孕最初两个月内的幼体。囊胚、胚的早期发育和胚胎发育是一个连续过程。在体节时期，三个胚层都发生了变化。外胚层在背部中线凹陷成沟，称神经沟，沟的两岸称神经脊。神经脊逐渐接近、愈合，致使神经演变为纵贯胚体的神经管。神经管和神经脊将来演化为神经系统。内胚层随着胚体卷曲成管状，称原肠，原肠依部位又分为前肠、中肠和后肠。

DBSS

70%乙醇

培养皿 尖镊子 尖剪刀 超净工作台 本生灯

1. 交配。将分笼的雄鼠和雌鼠合笼进行交配，雌鼠 3 天后可进入动情期，此时交配的成功率最高。这一过程可以有计划地进行，使胚胎在适宜的时间产生。为确定成功交配的时间需每天早晨检查雌鼠的阴栓。

2. 计算胚胎发育时间：将发现阴栓的日子定为零天，胚胎发育时间由这一天开始计算。整个孕期约为 19~21 天，分离完整胚胎进行细胞培养的合适时间为第 13 天，此时胚胎已相当大，但仍含有大量的未分化的间充质细胞，这是培养细胞的主要来源。但分离、处理超过妊娠期一半的胚胎可能需要许可证（例如在英国），所以用 9~10 天的胚胎也许更可取。虽然从这种胚胎分离的组织细胞的数目相对少一些，但能够生长的细胞的比例较高。除了脑和心脏之外的大部分器官于妊娠第 9 天开始形成，11 天之前很难分离。单一器官的分离在第 13~14 天比较容易，大部分器官于第 18 天完全形成。





3. 拉颈处死小鼠（U .K Schedule I procedure），用 70 % 乙醇仔细消毒其腹部表面。



4 . 于膈膜附近的腹中线位置横向撕开皮肤，向两侧翻开皮肤，显露未接触的腹壁。





5. 用无菌剪刀沿腹中线纵行剖开， 露腹腔脏器，此时可见充满胚胎的子宫位于后腹腔。





6. 取出子宫置于盛有 10 ml 或 20 ml DBSS （取材用BSS （含有高浓度抗生素的BSS（50 ml 盛于无菌烧杯中，用于冷却烧过的器械）），装在 25~50 ml 的螺口试管或通用容器内）的 25 ml 或 50 ml 的螺口瓶内。



7. 将未处理的子宫移入培养室，转人新的培养皿中，内含无菌的 DBSS 。



8. 分离胚胎：

(a) 用两个无菌镊子撕开子宫，注意保持镊子尖闭合，以免过度破坏子宫及对胚胎施加过大压力。



(b) 将胚胎与胎膜和胎盘剥离，放在培养皿的另一边，避开血污。



9. 将胚胎转入新的培养皿中，若有大量的胚胎要取（如 4 或 5 窝以上），可将培养皿置于冰上。

1. 将器械浸入乙醇后点燃，即对器械进行消毒时，要十分小心，同时不要将还很热的器械放回乙醇内！

2. 以上所有步骤应在组织培养室外进行，于小型超净台内快速操作将有助于保持无菌。不要把活体动物带入培养室因为活体动物可带入污染。若动物尸体需在培养室内处理，必须先浸入乙醇或用乙醇涂抹，用后尽快处理掉。

胚胎的发育过程是一个极为细致复杂的过程，是细胞和组织按照一定的顺序进行分化的过程，在这个过程中任何一个环节受到干扰，就会导致各种畸形。特别是器官迅速分化发育时，最易受到致畸因子的干扰。