利用序列特异性DNA亲和层析分离纯化一种前列腺细胞核蛋白

内容提要　目的:分离纯化RFA 结合蛋白并加以鉴定,为进一步深入研究RFA 及其结合蛋白相互作用和参与AR 介导的PSA 基因表达奠定基础。方法:培养人前列腺癌细胞PC23 ,提取核蛋白,以RFA 序列为探针进行亲和层析分离纯化目的蛋白,层析前后均用电泳迁移率变动分析( EMSA) 检测目的蛋白的功能。经SDS2PAGE 测定纯化蛋白的分子量,然后切下目的蛋白条带,进行蛋白质鉴定。结果:纯化蛋白在SDS2PAGE 图谱上36kD 附近呈现单一条带,氨基酸组成分析和质谱分析显示纯化蛋白条带含有2 种蛋白,与核内不均一核糖核蛋白A1 , A2 (hnRNPA1 , A2) 高度同源。结论: ①以Dynal M2280 链亲和素磁珠为固相介质的DNA 亲和层析,具有简便、快速、无毒的优点,可在对目的蛋白了解甚少的条件下,以较高的纯度将其纯化; ②RFA 结合蛋白与hnRNP 超家族成员hnRNPA1 , A2 高度同源,其与RFA 相互作用的具体机制和意义有待进一步研究。