利用ConcertPlant试剂从植物组织中纯化RNA实验

植物组织

Concert Plant RNA试剂NaCl氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水

一、材料

1.缓冲液、溶液和试剂

ConcertPlantRNA试剂(Invitrogen)，4°C预冷

NaCl,5mol/L(无RNA酶）

氯仿

异丙醇

乙醇，75%,用DEPC处理过的水配置

DEPC处理过的水

2.细胞和组织

适宜的植物组织（见二、方法中1），液氮冻后磨细

二、方法

1.向不超过0.lg研磨过的植物材料中加0.5ml冷的（4°C) Concert Plant RNA试剂。轻微振荡混合至样品重悬于试剂中。

2.室温下水平放置管子温育5min。

3.12000g离心2min以移去残渣。

4.将上清液转移到无RNA酶的新管中，并加0.1ml5mol/l的NaCl。在实验台上轻敲管子以混合。

5.加0.3ml氯仿，将管颠倒数次以混合。

6.4°C下12000g离心l0min。

7.将液相转移到无RNA酶的新管中。加等体积异丙醇至液相中。将管颠倒数次以混

合。室温下温育10min。

8. 4°C下12000g离心样品10min。

9.小心移弃上清液，避免扰动沉降物。

10.将lml75%乙酵加到沉降物中。室温下12000g离心lmin。

11.移弃上清液，小心避免扰动沉降物。短时离心并吸去所有残留液体。

12.将沉降物再溶解于10~30ulDEPC处理过的水中。如看到任何泥浊，则在室溫下

12000g离心溶液1min。将上清液转移到无RNA酶的新管中，储存于-70°C。