化学发光与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物方法学比较

　　病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国又为乙肝的高发区，约占世界HBV感染者的一半。乙肝病毒的病原体不仅具有传染性，还可能导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以HBV标记物的早期、准确、定量检测对乙肝临床诊断、疗效观察及预防具有重要意义。目前国内检测HBV-M使用较多的仍是占主导地位的ELISA法。随着化学发光技术的发展，其在免疫学检验方面的应用日益受到人们的重视。化学发光法检测乙肝病毒血清标志物具有高灵敏度、宽线性、反应快，影响因素少，结果准确等优点。因此，化学发光法更适用于需要进行定量、半定量检测的临床患者标本，显示出很好的应用前景。 
　　化学发光法检测肝炎标志物与ELISA法有何差异尚无明确的结论。本研究分别用化学发光和ELISA法检测乙型肝炎的血清学标志物，比较分析两种方法测试结果的一致性和差异性，为乙型肝炎的筛查、临床诊断、指导用药及其判断预后等不同目的的检测选择一种更为快速、准确且节约的方法。 
　　1资料与方法 
　　1.1一般资料 选择2013年10月～2014年3月就诊的HBV感染者96例，其中男52例，女44例；年龄23岁～76岁，平均47岁。其中单独HBsAg阳性5例，单独抗-HBe阳性11例，单独抗-HBs>1000IU/L的5例，单独抗-HBs>10IU/L但<1000IU/L6例，单独HBeAg阳性且DNA扩增<500拷贝4例。 
　　1.2仪器与试剂 
　　1.2.1仪器美国雅培全自动酶免分析仪ARCHITECT-i2000。 
　　1.2.2试剂上海科华生物技术有限公司肝炎标志物ELISA试剂盒；ARCHITECT-i2000 SR乙肝标志物配套试剂。 
　　1.3乙肝病毒血清标志物的检测 
　　1.3.1 ELISA法所用试剂由上海科华生物技术有限公司提供，于有效期内使用，操作和结果判断严格按试剂要求进行，并记录结果。 
　　1.3.2化学发光法将所收集到的血清用美国雅培全自动酶免分析仪ARCHITECT-i2000进行检测，乙肝六项标志物的定值质控血清购自雅培公司，操作和结果判断严格按试剂要求进行并记录结果。 
　　1.4统计学分析用SPSS16.0统计分析软件对化学发光法与ELISA法的检测结果进行χ2检验，以P<0.05为有统计学差异。 
　　2结果 
　　2.1乙肝结果比较乙肝两种方法测定HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBcIgM结果符合率分别为92.31%、92.31%、95.38%、81.54%、92.31%。经配对χ2检验HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBcIgM两种检测方法结果差异无统计学意义（P>0.05）。抗-HBe两种检测方法结果差异有统计学差异（P<0.05）。（见表1）。 
　　注：*表示两组间比较有统计学差异，P<0.05。 
　　3讨论 
　　常规的乙型肝炎病毒免疫标志物的血清学检查为五项即：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，是临床诊断、治疗、分析和判断HBV感染者病程及传染性的重要依据。HBV标记物的早期、准确、定量检测对乙肝临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。HBV-M的变化是评估乙型肝炎感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效监测指标之一。 
　　目前国内检测HBV-M使用较多的仍是占主导地位的ELISA法。ELISA法的优点在于它操作简单、适合于大批量标本的测定，并且成本低廉，其灵敏度也较好。但在临床检测中的ELISA法存在以下几个方面的缺点：①操作过程中各个微孔反应板的间隔小，容易污染，易产生假阳性结果；②无法定量，灵敏度相对较低；③由检测原理带来的前带现象无法解决；④无法完成HBV感染的动态观察以及低水平HBV感染指标检测，只能满足临床对单纯阳、阴性结果的判断。随着化学发光技术的发展，其在免疫学检验方面的应用日益受到人们的重视。化学发光免疫测定方法，简称CIA，是以吖啶酯（AE）及其衍生物标记单抗，AE分子中的活化基因与抗原或抗体末端氨基共价结合后，生成的标记物化学发光活性强、稳定性好。化学发光法检测乙肝病毒血清标志物具有高灵敏度、宽线性、反应快，影响因素少，结果准确等优点。 　　谭璐等[2]比较了化学发光法和ELISA法，结果发现两者灵敏度基本相似，对HBsAg，抗-HBs，HBeAg及抗-HBe的检测相互符合率均在95%以上，但化学发光法检测血清乙肝标志物的自动化程度比ELISA法高，并能定量检测HBsAg和抗-HBs，可动态观察疗效和监测病情。彭仕芳[3]等对1140例乙型肝炎患者血清HBV标志物用化学发光法和ELISA两种方法检测HBsAg、HBeAg、抗-HBc和抗-HBe四项指标，结果显示化学发光法检测各指标的阳性率均高于ELISA法，化学发光法对血清HBV标志物的检出阳性率高于ELISA法，特别是对HBeAg和抗-HBe指标的检测。 
　　本文两种方法测定肝炎标志物，只有抗-HBe在两种检测方法中有差异（P<0.05）。ELISA法和化学发光法检测乙肝的一致性较好，化学发光法灵敏度高于ELISA法，与国内研究结果相一致[1，2]。ELISA法在检测HBV血清标志物五项指标，特别是抗-HBe，抗-HBc浓度稍高于正常时，易出现漏检，而化学发光法法可弥补这点不足。化学发光法不仅能对HBsAg和抗-HBs进行定量测定，而且灵敏度和特异性更高，可减少低浓度HBsAg、HBeAg感染患者的漏诊[4]。这不仅是方法学上的进步，更重要的在于其能评估HBV感染后病情转归及抗病毒治疗疗效等，具有重要的临床意义。化学发光法由于使用全自动仪器及配套试剂，使人为因素减至最低，提高了方法的稳定性和结果的重复性，使批内差异与批间差异都较小。而ELISA法由于受孵育时间、洗板等因素的影响，容易导致非特异性反应的发生，造成结果的误差。在HBsAg、抗-HBs的检测中，化学发光法为定量结果，其能够对机体是否真正具有抵抗乙肝病毒的免疫力做出正确的评价，避免误导。本文还发现，抗-HBs定量在10mIU/L～100mIU/L之间的标本，ELISA结果为阳性，但此时抗体对HBV并无中和作用，仍有感染HBV的危险。只有"定量"在100mIU/L以上时才具有抵抗HBV入侵的作用[5]，因此对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义。ELISA法的操作简单、适合于大批量标本的测定，且成本低廉，灵敏度也很好，故不能完全淘汰。所以，ELISA方法检测为阳性的标本，应以适宜的方法复查，以减少误报。 
　　综上，两种方法各有其特点且都能满足临床需要，从方法学角度和自动化程度看，化学发光法技术优于ELISA法，但由于仪器、试剂较昂贵，不同目的检测应选用不同的方法：ELISA法可用于健康体检，术前肝炎病毒筛查等；化学发光法可用于肝炎患者的疾病监测、指导用药、疗效观察及判断预后等方面。